[发明专利]一种用于鉴定甜瓜单性花的分子标记物TJcM01及其应用

说明书

本发明公开了一种用于鉴定甜瓜单性花的分子标记物TJcM01及其应用，针对目前单性雌花甜瓜的选育中存在的问题，如年限长、效率低且成本高等缺点，本发明提供了一种鉴定甜瓜单性花的TJcM01分子标记及其专用引物，通过聚合酶链式反应，在甜瓜植株早期就可完成对单性雌花与非单性雌花甜瓜材料的区分，具有特异性好，准确率高，不受环境影响的优点。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种用于鉴定甜瓜单性花的分子标记物TJcM01及其应用。

背景技术

甜瓜Cucumis melo L.属于葫芦科Cucurbitaceae，黄瓜属Cucumis，是一种重要的园艺作物，其风味独特品质优良，深受消费者欢迎。据联合国粮农组织(FAO)数据显示我国甜瓜产量和栽培面积均居世界第一，这对提升农民的经济效益具有重要意义。甜瓜花性型按花器官着生部位可分为两类，即单性雌花与两性花，单性雌花与两性花相比是一种理想的杂交育种材料，受到广泛关注。目前栽培的甜瓜都是雄花两性花，在杂交一代制种过程中，授粉需要人工去雄，操作较为繁锁，若去雄操作不当会降低座果率和种子纯度。因此选育单性雌花甜瓜，是当前甜瓜遗传育种的重要目标之一。

Adnane Boualem证实甜瓜单性雌花由显性单基因A控制，发现甜瓜的雄性两性花是由于A基因单核苷酸突变导致A57V替换，造成CmACS-7编码的乙烯生物合成酶发生突变造成的。此外，葫芦科花性型的表达模式可以通过激素(如乙烯)和环境因素进行修饰。

当前对于单性雌花甜瓜的选育，一般还采用传统杂交的方法，具有年限长、效率低且成本高等缺点。分子标记辅助育种可以直接从DNA水平对性状进行选择，具有高效，准确及经济等优点，可大幅缩短育种周期，是传统育种技术的有力补充。InDel标记具有准确性高、稳定性好等优点，并且其检测简单便捷，对仪器设备和技术要求较低，能够基于插入/缺失位点两侧的序列设计特异引物进行PCR扩增，直接在电泳技术平台上检测即可。

开发合适的InDel分子标记，用于单性雌花甜瓜品种或品系的选育，能够加快育种进程，提高育种效率，降低育种成本，具有重要的实际应用价值。

发明内容

针对目前单性雌花甜瓜的选育中存在的问题，如年限长、效率低且成本高等缺点，本发明提供了一种鉴定甜瓜单性雌花的TJcM01分子标记及其专用引物，通过聚合酶链式反应，在甜瓜植株早期就可完成对单性雌花与非单性雌花甜瓜材料的区分，具有特异性好，准确率高，不受环境影响的优点。

一种鉴定甜瓜单性花的分子标记TJcM01的专用引物，其特征是所述引物为从5`端到3`端的第1-26位的单链DNA序列的正向引物CCAAATCTTCGCACCTGAACATTAAC；从5`端到3`端的第1-32位单链DNA序列的反向引物ACTTCTTTGGTAATGAACCTTTTCATATGTAG。

利用本发明的分子标记专用引物，以待检测材料的基因组DNA为模板，通过PCR扩增获得分子标记，通过测序发现，在单性雌花的甜瓜材料中分子标记大小为235bp的PCR产物，从5`端到3`端的单链DNA序列为：CCAAATCTTCGCACCTGAACATTAACAAAATTATATAGTAATTATCTTAATTAATTATCCTCATCGATAAAGTGAATATCTAATTAAAAATTTAAAGTCAAAAGTGTGAATTTCTTGAAATATCAAATTAAGACAAAATTCAAATCAATTTGAAAACATATAAACAAAATGGTAAATTAGACAAAAAAAAAAAATCCTAAAAACTACATATGAAAAGGTTCATTACCAAAGAAGT。

利用本发明的专用引物鉴定甜瓜的分子标记方法，其特征是提取甜瓜待检测样品的基因组DNA作为模板，利用分子标记专用引物进行聚合酶链式反应(PCR)扩增，再通过电泳对扩增产物进行检测。

1)利用CTAB法提取待测甜瓜样品任意组织或器官的基因组DNA。