[发明专利]产生IMP的微生物及利用其生产IMP的方法

说明书

本公开内容涉及产生5’‑肌苷酸的棒状杆菌属的微生物，其具有增强的IMP输出蛋白的活性；以及利用其制备5’‑肌苷酸的方法。

技术领域

本公开内容涉及具有增强的IMP输出蛋白活性的产生5’-肌苷酸的棒状杆菌属(Corynebacterium)的微生物以及利用该微生物生产5’-肌苷酸的方法。

背景技术

5’-肌苷酸(以下称为“IMP”)，是一种基于核酸的物质，是核酸代谢途径中的中间体，并且用于各种领域如食品、药物和各种医疗应用。特别地，IMP与5’-鸟嘌呤单磷酸(以下称为“GMP”)一起被广泛用作食品调味添加剂或食品。虽然已知IMP本身具有牛肉味道，但也已知的是其增强了谷氨酸一钠(MSG)的风味；因此，IMP作为一种可口的基于核酸的调味品引起了诸多关注。

用于制备IMP的方法的例子包括对从酵母细胞提取的核糖核酸进行酶促降解的方法(日本专利公开第1614/1957号)、对通过发酵产生的肌苷进行化学磷酸化的方法(Agri.Biol.Chem.，36，1511等)、以及培养直接产生IMP的微生物并在培养基中回收IMP的方法。在这些方法中，使用最广泛的是使用能够直接生产IMP的微生物的方法。

为了使用通过微生物发酵直接生产IMP的方法以高产率生产IMP，IMP应当被顺利地输出。为了实现这样的目的，本发明人进行了广泛的研究，并研究了涉及IMP输出能力的输出蛋白；结果他们识别了参与IMP输出的蛋白质ImpE1和ImpE2。已经确认，当参与IMP输出的蛋白质ImpE1和ImpE2的活性增强时，IMP浓度增加，由此完成了本公开内容。

发明内容

[技术问题]

本公开内容的一个目的是提供产生IMP的棒状杆菌属的微生物，其具有增强的IMP输出蛋白活性。

本公开内容的另一目的是提供用于制备IMP的方法，所述方法包括：在培养基中培养棒状杆菌属微生物；以及从微生物或培养基中回收IMP。

[技术解决方案]

在下文中，将详细描述本公开内容。同时，本公开内容中公开的每个描述和实施方案可以分别应用于其他描述和实施方案。即，本公开内容中公开的各种要素的所有组合均落入本公开内容的范围内。此外，以下公开的具体描述不应被解释为限制本公开内容的范围。

为了实现上述目的，本公开内容的一个方面是提供一种产生IMP的棒状杆菌属的微生物，其具有增强的IMP输出蛋白活性。

如本文所用的，术语“5’-肌苷酸输出蛋白”是指参与5’-肌苷酸(IMP)的胞外输出的蛋白质。对于本公开内容的目的，上述术语可与具有IMP输出能力的蛋白、具有5’-肌苷酸输出能力的蛋白、IMP输出蛋白等互换使用，并且可以具体表示为ImpE，更具体地为ImpE1和ImpE2，但不限于此。另外，该蛋白质可以来源于棒状杆菌属，具体为停滞棒杆菌(Corynebacterium stationis)，但不限于此。例如，明显的是可以使用来源于停滞棒杆菌的具有IMP输出能力和与之相对应的效果的蛋白质作为本公开内容的蛋白质。

该蛋白质可以由例如SEQ ID NO：1或2的氨基酸序列组成，但包括与该蛋白质具有相同活性的序列，并且本领域技术人员可以从众所周知的数据库NCBI的GenBank获得序列信息。另外，该蛋白质可以包括SEQ ID NO：1或2的氨基酸序列或与其具有至少80％同源性的氨基酸序列，但不限于此。具体而言，IMP输出蛋白可以包含SEQ ID NO：1或2、或与SEQ IDNO：1或2具有至少80％、90％、95％、96％、97％、98％或99％同源性的多肽。另外，明显的是，可以使用一些序列缺失、修饰、替代或增加的蛋白质作为本公开内容的蛋白质，只要其氨基酸序列具有上述同源性并表现出对应于该蛋白质的效果即可。