[发明专利]检测尿DcR2/Ucr水平的方法及其应用在审
申请号: | 201810193319.9 | 申请日: | 2018-03-09 |
公开(公告)号: | CN108426998A | 公开(公告)日: | 2018-08-21 |
发明(设计)人: | 陈佳;陈客宏;何娅妮;王梨名 | 申请(专利权)人: | 中国人民解放军陆军军医大学第三附属医院(野战外科研究所) |
主分类号: | G01N33/535 | 分类号: | G01N33/535 |
代理公司: | 成都玖和知识产权代理事务所(普通合伙) 51238 | 代理人: | 胡琳梅 |
地址: | 400010 重*** | 国省代码: | 重庆;50 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 检测 高剂量钩状效应 稀释 肾小管间质损伤 假阴性结果 重要意义 尿肌酐 尿液 肾病 矫正 应用 并用 | ||
本发明涉及检测尿DcR2/Ucr水平的方法及其应用,通过将尿上清稀释2~16倍,再采用ELISA方法检测稀释后尿液中的DcR2水平,并用尿肌酐矫正;该方法能够很好解决CKD患者尿DcR2检测过程中的高剂量钩状效应,避免高剂量钩状效应所致的假阴性结果,对检测尿DcR2对肾病患者肾小管间质损伤具有重要意义。
技术领域
本发明属于医学检测领域,涉及检测尿DcR2/Ucr水平的方法,还涉及该方法的应用。
背景技术
诱骗受体(decoy receptor)DcR2是肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体的跨膜受体,分子量为42KD,被认为是细胞衰老的标志。DcR2胞外段可被剪切而在尿液中能被检测,既往我们研究发现尿DcR2可作为评价糖尿病肾病肾小管间质损伤和肾功能进展的生物标志物。因此,精准有效的检测尿DcR2对肾病患者肾小管间质损伤的诊断及疗效评估具有重要意义。
常规检测尿DcR2的方法是酶联免疫吸附试验(ELISA),该方法具有较好的敏感性和特异性,在临床及科研实践中可得以广泛的使用。然而,当检测样本中抗原或抗体浓度达到或超过某一高值时,阳性信号可呈现降低趋势,即出现高剂量钩状效应(high-dose hookeffect),导致的假低值或假阴性值。也即在肾小管间质损伤严重的慢性肾脏病(chronickidney disease,CKD)患者尿液中存在高浓度的游离DcR2,可能更容易导致高剂量钩状效应的发生。我们的研究发现,在尿液原液中DcR2水平并不随着CKD肾小管间质损伤评分增加而升高,提示可能存在高剂量钩状效应。
因此,避免高剂量钩状效应所致的假阴性结果,对检测尿DcR2对肾病患者肾小管间质损伤具有重要意义。
发明内容
有鉴于此,本发明的目的之一在于提供检测尿DcR2/Ucr水平的方法;该方法通过连续倍比稀释法简单便捷避免钩状效应的方法;本发明的目的之二在于提供检测尿DcR2水平的试剂在诊断肾组织损伤的试剂盒中的应用。
为实现上述发明目的,本发明提供如下技术方案:
1、检测尿DcR2/Ucr水平的方法,包括如下步骤:收集尿上清,然后将尿上清稀释2~16倍,再采用ELISA方法检测稀释后尿液中的DcR2水平,并用尿肌酐矫正。
优选的,所述尿上清稀释的倍数为4~8倍。
优选的,所述尿上清稀释的倍数为8倍。
优选的,所述ELISA使用检测尿DcR2的ELISA检测试剂盒,所试剂盒购买于英国abcam公司。
2、检测尿DcR2水平的试剂在制备诊断肾组织损伤的试剂盒中的应用。
优选的,所述试剂盒为ELISA检测试剂盒。
本发明的有益效果在于:本发明公开了检测尿DcR2/Ucr水平的方法;该方法通过连续倍比稀释法,避免高剂量钩状效应所致的假阴性结果,该方法简单,便捷,并且能提高尿DcR2检测的特异性和灵敏度,因此该方法检测的尿DcR2水平可用于肾组织损伤程度分级,对肾病患者肾小管间质损伤诊断具有重要意义。
附图说明
为了使本发明的目的、技术方案和有益效果更加清楚,本发明提供如下附图进行说明:
图1不同稀释倍数下对照组和CKD患者的尿DcR2/Ucr水平。A:不同稀释倍数下CKD患者尿DcR2/Ucr水平;B:4倍稀释后CKD患者尿DcR2/Ucr水平随着肾小管间质损伤评分增加而升高。(*p<0.05vs.control,#p<0.05vs.TII0,&p<0.05vs.TII1,$p<0.05vs.TII2);
图2为ROC曲线分析CKD患者尿液倍比稀释后的DcR2/Ucr对肾小管间质损伤的评价效能。
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