[发明专利]一种将抗增殖蛋白2转染到成骨细胞中的方法在审
| 申请号： | 201810195356.3 | 申请日： | 2018-03-09 |
| 公开（公告）号： | CN108517314A | 公开（公告）日： | 2018-09-11 |
| 发明（设计）人： | 周志昆;傅健英 | 申请（专利权）人： | 广东医科大学 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C12N15/85 |
| 代理公司： | 珠海智专专利商标代理有限公司 44262 | 代理人： | 林永协 |
| 地址： | 523808 广东省*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 成骨细胞 转染 抗增殖 蛋白 第三代 质粒 绝经后骨质疏松症 真核表达载体 瞬时转染 细胞汇合 重要意义 培养基 有效地 脂质体 孵育 乳鼠 抗生素 新鲜 治疗 研究 | ||
1.一种将抗增殖蛋白2转染到成骨细胞中的方法，其特征在于：包括以下步骤：
步骤一：从乳鼠中提取原代成骨细胞，将所述原代成骨细胞在含10％FBS的α-MEM培养基中培养，直至得到第三代成骨细胞；
步骤二：提取pcDNA3.1(+)-phb2质粒，所述pcDNA3.1(+)-phb2为含抗增殖蛋白2片段的pcDNA3.1(+)真核表达载体；
步骤三：将第三代成骨细胞在37℃下以及5％CO2的条件下孵育；当细胞汇合度≥90％时，用脂质体将pcDNA3.1(+)-phb2质粒进行瞬时转染；
步骤四：转染后，除去旧的培养基，加入新鲜的无抗生素的含10％FBS的α-MEM培养基，继续培养。
2.根据权利要求1所述的一种将抗增殖蛋白2转染到成骨细胞中的方法，其特征在于：
步骤一中，所述乳鼠为1至3日龄的Sprague-Dawley大鼠。
3.根据权利要求1所述的一种将抗增殖蛋白2转染到成骨细胞中的方法，其特征在于：
步骤二中，使用无内毒素质粒小提中量试剂盒提取pcDNA3.1(+)-phb2质粒。
4.根据权利要求1至3任一项所述的一种将抗增殖蛋白2转染到成骨细胞中的方法，其特征在于：
步骤三中，所述脂质体为Lipofectamine 3000。
5.根据权利要求4所述的一种将抗增殖蛋白2转染到成骨细胞中的方法，其特征在于：
步骤三中，所述转染条件为：Lipofectamine 3000与质粒的体积质量比为15μl：5μg。
6.根据权利要求5所述的一种将抗增殖蛋白2转染到成骨细胞中的方法，其特征在于：
步骤三中，所述孵育包括将所述第三代成骨细胞以每孔30万接种到6孔板中进行孵育。
7.根据权利要求1至3任一项所述的一种将抗增殖蛋白2转染到成骨细胞中的方法，其特征在于：
步骤四中，所述除去旧的培养基是在转染后6小时进行。
8.根据权利要求1至3任一项所述的一种将抗增殖蛋白2转染到成骨细胞中的方法，其特征在于：
步骤四中，所述继续培养的时间为48小时。
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