[发明专利]一种磁珠混合液、核酸保存方法、核酸提取试剂及试剂盒

说明书

本发明公开了一种磁珠混合液，其包括磁珠、蛋白酶、变性剂、甘油、缓冲剂和核酸助沉剂。本发明还公开了一种核酸保存方法、核酸提取试剂及试剂盒。将磁珠混合液的各组分按一定比例预混合，进行核酸提取时可一次取相应体积即可均匀添加所需组分，用量更精准、操作更加简单；将各成分按比例预混，还能降低包装成本和运输成本。本发明的磁珠混合液，可以使磁珠保存的温度范围更广。采用本发明的磁珠混合溶液作为核酸(或含核酸的载体颗粒)溶剂，可以在核酸提取时同时进行监控核酸的提取，节省磁珠法核酸提取试剂的加样步骤，同时可以保证复孔间核酸加入浓度的均一性。采用磁珠混合液能稳定保存核酸。

技术领域

本发明涉及生物化学技术领域，尤其涉及一种磁珠混合液、核酸保存方法、核酸提取试剂及试剂盒。

背景技术

磁珠法核酸提取试剂是生物科学和纳米材料科学二者合一的高新技术产品，主要运用纳米技术对超顺磁性纳米颗粒的表面进行改良和表面修饰后，制备成超顺磁性氧化硅纳米磁珠。该磁珠能在微观界面上与核酸分子特异性地识别和高效结合，利用氧化硅纳米微球的超顺磁性，在离液盐和外加磁场的作用下，能从血液、动物组织、食品、病原微生物等样本中分离出DNA和RNA，可应用在临床致病诊断、输血安全、法医学鉴定、环境微生物检测、食品安全检测、分子生物学研究等多种领域。

目前磁珠法核酸提取试剂核酸提取过程主要分为四步：裂解—结合—漂洗—洗脱。其中裂解步骤主要使用裂解液、核酸助沉剂(Carrier RNA)和蛋白酶 K，结合步骤主要使用纳米磁珠。市面上大部分磁珠法核酸提取试剂是由裂解液、冻干蛋白酶K、冻干CarrierRNA和纳米磁珠悬浮液组成，核酸提取前使用蛋白酶K缓冲液溶解蛋白酶K干粉，缓冲液溶解Carrier RNA干粉，再根据提取用量使蛋白酶K溶液、Carrier RNA溶液与裂解液、磁珠悬浮液和待提取样本混合裂解。该提取试剂虽然可以在常温环境下长期保存(1年以上)且具有较好的稳定性，但提取试剂的各组分单独存放，一套提取试剂需要使用8个以上的无 DNase和RNase保存管或瓶，造成包装体积增大；而且复溶蛋白酶K和Carrier RNA，核酸提取步骤需要逐个试剂按体积加入；复溶体积误差导致蛋白酶K和 Carrier RNA浓度不准确、提取过程中加入体积误差导致最终浓度出现偏差。

因此，市面上大部分磁珠法核酸提取试剂不仅造成成本和运输资源的浪费，而且用户使用过程中操作繁琐、容易使用用量出错。磁珠由于是纳米微球，不能进行冻结保存(-20℃)，因此保存方式仅为常温或冷藏以及Carrier RNA复溶后需分装-20℃冷冻保存，2-8℃保存期一般不超过48小时。由于磁珠法核酸提取试剂具有快速、回收率高以及能应用于自动化等优点，因此需要一种更简便准确的方法。

脱氧核酸核酸(DNA)是一种生物大分子，可组成遗传指令，引导生物发育和生命机能运作。DNA是由许多脱氧核苷酸按一定碱基顺序彼此用3’，5’- 磷酸二酯键相连构成的长链，大多数DNA是由双链构成，两条链之间以氢键链接，氢键和磷酸二酯键在酸性环境、高温、反复冻融、DNA酶等条件下容易降解断裂，导致DNA保存的遗传信息损失。

重组质粒是把目的DNA片段采用酶与质粒载体链接而成的一种环状双链 DNA，通过在细菌内部大量复制后重新提取得到。重组质粒含有目的基因片段，同时较容易大量获得，因此常用于代替靶基因模板作为试剂盒阳性对照、质控品等。

目前为了维持DNA或重组质粒结构的完整性，避免大规模断裂和降解，最佳的保存方法是冻干-80℃或者液氮低温保存，但DNA冻干存在操作困难、DNA 损失较大和复溶操作麻烦等问题，以及-80℃或者液氮低温保存需要昂贵的设备和后期维护费用，实际应用不具可操作性。科研单位或企业应用较多的核酸保存方法为将核酸溶解在TE Buffer(TE缓冲液)或双蒸水中，-20℃长期保存，但随着时间的推移，核酸仍会出现降解。