[发明专利]基于雪莲愈伤组织提取、富集和纯化雪莲总黄酮的方法

说明书

本发明公开了一种基于雪莲愈伤组织提取、富集和纯化雪莲总黄酮的方法，依次包括：将雪莲愈伤组织干燥并粉碎置入超临界萃取釜中萃取，卸料后进行过滤得到提取液和余渣；余渣加入至乙醇溶液中进行微波萃取，再次过滤得到提取液和余渣；余渣加入至乙醇溶液中进行超声波处理，再过滤得到提取液；将雪莲提取液浓缩，进行大孔吸附树脂柱吸附；大孔吸附树脂依次用乙醇洗脱。本发明所涉及的提取方法，与现有工艺相比，使用了超临界提取工艺，使得处理条件较为温和，可以使雪莲中易挥发易分解成分无损原料利用率高。还使用了微波和超声波提取方法继续对经超临界提取工艺处理后的余渣进行处理，进一步的提取原料中的黄酮成分，进一步提高原料的利用率。

技术领域

本发明涉及雪莲培养物处理方法技术领域，尤其是一种基于雪莲培养物提取、富集和纯化雪莲总黄酮的方法。

背景技术

雪莲属于菊科，凤毛菊属植物，为多年生草本珍稀中草药，含有金合欢素、粗毛豚草素、芦丁、槲皮素等多种黄酮类成分，具有散寒除湿、活血通经、强筋助阳、抗炎镇痛等功能，可治疗风湿性关节炎、妇女小腹冷痛、麻疹不透、肺寒咳嗽、抗衰老及抑制癌细胞增生等症。近年来雪莲的药用价值和保健作用得到市场的肯定，市场需求量大增，大量的掠夺性采挖致使野生雪莲资料严重匮乏，储量急剧减少，少数种类已处于灭绝的边缘。

细胞培养是获得雪莲中主要次生代谢物的一条途径，目前在雪莲愈伤组织及次生代谢产物调控方面已有大量报送，已筛选出高产细胞系、建立了代谢调控方法。对雪莲培养物中黄酮的提取一般采用室温溶剂提取法，提取方法简单，但存在提取时间长、效率低等问题。常规的对雪莲愈伤组织中总黄酮的提取方法还包括加热回流提取法、索氏提取法以及超声提取法等。在使用单独的提取方法对雪莲愈伤组织进行总黄酮的提取和富集时，还会有黄酮类成分提取不充分等问题。

发明内容

本发明的目的是提供一种基于雪莲培养物提取、富集和纯化雪莲总黄酮的方法，能够对雪莲愈伤组织中的总黄酮成分能够进行充分的提取，并能减少有机溶剂的用量。

为解决上述技术问题，本发明的目的是这样实现的：

本发明所涉及的的一种基于雪莲培养物提取、富集和纯化雪莲总黄酮的方法，依次包括如下步骤：

步骤A、将雪莲培养物干燥并粉碎至100-150目，置入超临界萃取釜中，所采用的超临界流体为CO₂或CO₂挟带乙醇，进行预处理，动态萃取，控制萃取釜压力20-30MPa，萃取温度40-60℃，分离压力6-10MPa，分离温度30-50℃，时间为60-150分钟后停止，减压卸料后，进行过滤得到雪莲黄酮第一提取液和余渣；所述的超临界流体中CO₂所挟带的乙醇浓度为70-95%；

步骤B、对步骤A所得到的余渣加入至乙醇溶液中进行微波萃取工艺处理，所使用的微波的波长为200-500nm；再次过滤得到雪莲黄酮第二提取液和余渣；

步骤C、对步骤B所得到原余渣加入至乙醇溶液中进行超声波处理，再将过滤得到雪莲黄酮第三提取液；

步骤D、将雪莲黄酮第一提取液、雪莲黄酮第二提取液和雪莲黄酮第三提取液混合得到雪莲黄酮提取液；将雪莲提取液浓缩至乙醇浓度为0-15%体积比，进行大孔吸附树脂柱吸附；

步骤E、将吸附黄酮后的大孔吸附树脂依次用0％-95％乙醇洗脱，收集30％-50％洗脱液，浓缩后即得黄酮固含量为40-50％的雪莲提取物。

作为上述方案的进一步说明，步骤B和步骤C中，所使用的乙醇溶液的浓度为70-95%；所述的乙醇溶液的重量为雪莲培养物余渣的10-20倍。

作为上述方案的进一步说明，步骤B中，所使用的微波萃取的处理时间为10-30min。