[发明专利]RHCG基因在制备治疗癌症药物及诊断性试剂盒中的应用

说明书

本发明公开了RHCG基因在制备有关癌症诊断性试剂盒及靶向治疗药物中的应用。本发明利用组织水平验证及免疫组化证实，结果显示RHCG在胃癌组织中表达增高，且RHCG表达较高的患者预后较差；本发明通过体外细胞功能学实验，证实转染RHCG‑sgRNA后的HGC27和AGS细胞，RHCG的基因表达明显降低、细胞增殖能力下降，而转染了Flag‑RHCG后的MKN45和SNU719细胞，RHCG的基因表达明显增加、细胞增殖能力升高；本发明证实敲除RHCG胃癌细胞的对奥沙利铂的化疗敏感性提高；而过表达RHCG胃癌细胞的对奥沙利铂的化疗敏感性降低；RHCG在制备癌症诊断性试剂盒和癌症靶向治疗药物有很好的应用。

技术领域

本发明属于癌症精准医疗药物技术领域，具体涉及RHCG基因作为胃癌诊疗靶点的用途。

背景技术

胃癌(gastric cancer，GC)是最常见的恶性肿瘤之一，它的发生与多种因素相关，如遗传因素、幽门螺杆菌感染和饮食习惯等。根据最新GLOBOCAN数据显示，胃癌是世界上第五大最常见的癌症类型，近年来尽管胃癌患者的死亡率有所下降，但是它仍是第三大最常见的癌症死亡相关原因。目前胃癌的治疗方法多种多样，其中最有效的治疗方法为根治性切除和化疗组合，但尽管如此，患者复发和转移的风险仍很高，5年生存率低于40％。我国胃癌患者的早期诊断率低，预后差，严重威胁居民的健康。因此，探索胃癌的发生发展机制、寻找新的敏感且特异的分子治疗靶点对胃癌诊断和治疗至关重要。

RHCG(RHC glycoprotein)属于Rhesus(Rh)家族，Rh家族蛋白根据功能的不同分为两个组，即RH转运氨糖蛋白(RHAG，RHBG和RHCG)和非转运(非糖基化)RH蛋白(RHD和RHCE)，RH基因家族编码的蛋白为保守蛋白，该家族的成员共享12个跨膜螺旋折叠结构，其与MEP和Amt具有20-27％的同源性。RHAG仅在红细胞和红细胞前体细胞中表达，RHBG和RHCG为非红细胞同系物，它们在红细胞中不表达，但在重要的氨代谢组织中都有表达，包括肾、肝、睾丸、中枢神经系统、胃肠道和骨骼肌。已有研究显示RHAG，RHBG和RHCG均具有运输氨的功能，其中RHCG主要负责肾集合管上皮细胞膜的氨分泌，敲除RHCG基因的小鼠由于其尿液中NH₄⁺排除受损可导致血液的异常酸化。RHCG定位于人的15号染色体(15q25)，有11个外显子和富含C/G的启动子，可广泛控制上皮的表达。体外研究表明，RHCG可能在48NLS 50序列处携带有复杂的N-聚糖，RHCG是一种新型的多层膜糖蛋白，在组织中其可作为上皮转运蛋白维持正常细胞稳态。根据与H⁺-ATP酶、水通道蛋白-2、钙结合蛋白-D28k共定位实验显示，RHCG在肾脏的远曲小管和连接段细胞、A型闰细胞和非A非B细胞中表达，而在B型闰细胞，主细胞和内髓集合管细胞中不表达。RHCG的表达与肿瘤密切相关，在肾脏肿瘤中，RHCG在肾嫌色细胞癌和肾嗜酸细胞瘤中高表达，但在肾透明细胞癌和肾乳头状细胞癌中低表达。因肾嫌色细胞癌和肾嗜酸细胞瘤似乎起源于A型闰细胞，故RHCG与肿瘤的相关性可能与肿瘤细胞的起源有关。在食管癌中，RHCG在食管鳞状细胞癌中表达下调，但在多个鳞状上皮中表达。因此RHCG基因在肿瘤生物学中可能具有双重作用，即支持肿瘤发生发展和抗肿瘤性。在TCGA数据库中显示，RHCG在结肠腺癌中、肝细胞肝癌中高表达，但在食管癌和浸润性乳腺癌中低表达。在ATLAS数据库中显示，高表达RHCG在肺腺癌中导致不良预后，而在肺鳞状细胞癌中，高表达RHCG导致好的预后。但是，RHCG与胃癌的关系目前还不明确，其在胃癌中的表达和具体调节机制还不清楚。

发明内容

发明目的：针对现有技术中存在的不足，本发明的目的是提供一种RHCG基因在制备用于治疗胃癌药物中的应用，满足抗癌药物的使用需求。本发明的另一目的是提供一种RHCG基因在制备用于癌症诊断或预后判断的试剂盒中的应用。

技术方案：为了实现上述发明目的，本发明采用的技术方案如下：