[发明专利]一种快速鉴定川山茶传统名品的方法有效
申请号: | 201810200510.1 | 申请日: | 2018-03-12 |
公开(公告)号: | CN108410967B | 公开(公告)日: | 2018-12-28 |
发明(设计)人: | 权俊萍;张绍林;韩国勇;刘家艳;刘宇;田波;沈薛洁 | 申请(专利权)人: | 重庆市南山植物园管理处 |
主分类号: | C12Q1/686 | 分类号: | C12Q1/686 |
代理公司: | 重庆晶智汇知识产权代理事务所(普通合伙) 50229 | 代理人: | 李靖 |
地址: | 400065 重*** | 国省代码: | 重庆;50 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 快速鉴定 鉴别 聚丙烯酰胺凝胶电泳 特异性条带 传统经验 观测数据 品种鉴定 银染检测 多态性 引物 应用 判定 定性 节约 清晰 | ||
1.一种快速鉴定川山茶传统名品的方法,其特征在于:
该方法包含下列步骤:
(1)取样:样品来自重庆市南山植物园国家山茶种质资源库中保育的成年健康植株,共包括川山茶10个传统名品,分别为:白洋片、川玛瑙、胭脂鳞、紫金冠、金顶大红、七心红、川牡丹、醉杨妃、重庆红、白玉片;
(2)DNA提取:提取山茶基因组DNA;
(3)以步骤(2)提取的川山茶基因组DNA为模板,将3对SSR标记引物用于PCR扩增及电泳;
(4)统计电泳后的DNA指纹图谱,建立“0”、“1”矩阵表,若两品种间差异位点数量≥2,则判定两品种为不同品种;
所述的3对SSR标记引物分别为P06、A54和A80,所述P06由核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的上游引物和核苷酸序列如 SEQ ID NO.2 所示的下游引物组成,所述A54由核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示的上游引物和核苷酸序列如 SEQ ID NO.4 所示的下游引物组成,所述A80由核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示的上游引物和核苷酸序列如 SEQ ID NO.6 所示的下游引物组成。
2.如权利要求1所述的一种快速鉴定川山茶传统名品的方法,其特征在于:所述PCR反应采用20µL扩增体系:
50ng模板DNA、2.5 mmol·L-1 Mg2+、0.05mmol·L-1 dNTPs、0.2µmol·L-1引物和
0.5U TaqDNA聚合酶;
所述PCR扩增条件:94℃ 5min,94℃ 30s,52℃ 30s,72℃ 30s,38次循环,72℃ 最后延伸5min,扩增完后4℃保存。
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