[发明专利]一种用于共振光散射同时检测AFP和miRNA-122的生物传感器及其制备方法

说明书

本发明公开了一种用于共振光散射同时检测AFP和miRNA‑122的生物传感器及其制备方法；该传感器由cDNA1和cDNA2杂交双链及镶嵌在所述杂交双链中的甲基紫(MV)构成，其中，cDNA1包含AFP适配体片段，cDNA2包含miRNA‑122适陪体片段。通过甲基紫(MV)和dsDNA之间的电子相互作用产生扩增的共振光散射信号，双功能免标记探针传感器对AFP和miRNA‑122的检出限分别为0.94μg/L和98pM，建立了更为高效、快速，低廉的肿瘤标志物检测技术，在早期肝癌临床筛查中具有潜在应用。

技术领域

本发明涉及一种分子检测探针，特别涉及一种用于共振光散射同时检测肿瘤标志物AFP和miRNA-122的双功能免标记探针传感器；属于分子检测领域。

背景技术

癌症已成为世界上最具破坏性的疾病之一，每年造成1000多万例新发病例和760万例死亡病例。肝细胞癌(HCC)是最常见的癌症之一，是全球第三大癌症死亡原因。然而，通过早期检测和治疗完全可以避免肝癌死亡的发生。因此肿瘤标志物的检测对于早期筛查癌症、鉴别良性和恶性疾病、评估疾病程度、监测肿瘤治疗反应和预测复发是重要的。但是，单个肿瘤标志物的检测由于其特异性有限，所以不能提供很好的癌症诊断。因此，同时检测多个肿瘤标志物的方法对于癌症的分析检测具有重要意义。

在过去几年中，已经提出了用于同时检测多种肿瘤标志物的方法。这些方法包括荧光检测、电化学免疫测定和光子悬浮阵列。例如，李等报道了一种夹心型电化学免疫传感器，用于同时检测癌胚抗原(CEA)和甲胎蛋白(AFP)。研究了双色荧光量子点同时检测癌胚抗原(CEA)和神经元特异性烯醇化酶(NSE)。这些方法具有几个潜在的优点，如良好的特异性和敏感性。然而，这些方法仍然需要标记，而标记非常的昂贵并且反应耗费时间。于是，低成本、高灵敏度、高选择性的检测方法受到了极大地关注，也成为了目前检测技术发展的方向之一。

AFP是一种重要的肿瘤标志物，它是分子量为69,000的酸性糖蛋白。AFP可以在胎儿肝脏和卵黄囊中被发现，出生后逐渐消失。健康成年人中AFP浓度低于25μg/L，但在肝脏病理变化如HCC患者中可能超过400μg/L。当然，AFP升高也发生在肝癌以外的慢性肝病和恶性肿瘤中；因此，单独将AFP用于HCC的诊断和监测已经受到严重挑战。microRNA(miRNA)作为另一个重要的肿瘤标志物，它是一组单一的具有19-23个核苷酸长的短序列和内源非蛋白编码RNA。miRNA-122是肝脏中最丰富的miRNA，它参与了肝细胞癌地发展和丙型肝炎地感染.因此，同时检测AFP和miRNA-122在临床治疗中对于筛选早期肝癌中具有非常重要的意义。

发明内容

为了克服现有技术中的缺点，改善常规肿瘤标志物分析中依赖光化学分析技术导致的检测成本高、检测时间长的问题，本发明的目的是在于提供一种低成本、高灵敏度、高选择性检测，可以实现共振光散射同时高效、快速、高灵敏检测肿瘤标志物AFP和miRNA-122的双功能免标记探针传感器。

本发明的另一个目的是在于提供一种简单、低成本制备所述双功能免标记探针传感器的方法。

为实现上述目的，本发明提供了一种用于共振光散射同时检测肿瘤标志物AFP和miRNA-122的双功能免标记探针传感器，其由cDNA1和cDNA2杂交双链及镶嵌在所述杂交双链中的甲基紫(MV)构成；

所述cDNA1序列号为：TCAGGTGCAGTTCTCGACTCGGTCTTGATGTGGGTTGGAGTCTGAGAAAGGAGTTTG；

所述cDNA2序列号为：CAAACACCATTGTCACACTCC AACCCACAT CAAGACCGAGTCGAGAACTGCACCTGA；(cDNA1及cDNA2等DNA自己设计并委托生工生物工程(上海)股份有限公司合成)。

本发明还提供了一种用于共振光散射同时检测肿瘤标志物AFP和miRNA-122的双功能免标记探针传感器的制备方法，其包括以下步骤：