[发明专利]一种广谱抑菌活性的多粘类芽孢杆菌DYr4.4及制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种广谱抑菌活性的多粘芽孢杆菌DYr4.4及制备方法和应用，CCTCC M 2018023。步骤是：A、无菌环境下挑取菌株单菌落，接种于培养液，放置在恒温培养振荡器中，调节温度、转速，振荡培养；B、每瓶装发酵液，放置在大振幅恒温冷冻摇床中，振荡培养；C、配制培养液：依次加入罐中，封闭罐体，对培养液加热消毒，点燃酒精将接种口消毒，在酒精持续燃烧下倒入上步制备的2 L发酵液，调控搅拌机的转速；D、将发酵液过滤，在过滤后的发酵液中加入辅料轻质碳酸钙粉末，送入离心喷雾干燥塔内干燥，收集干粉。该菌在制备治疗或预防梨树锈病药物中的应用。该菌株的干粉发酵对梨锈病具有显著的防病效果，防效达到67.09%以上，显著抑制梨树提前落叶。

技术领域

本发明属于植物病害生物防治技术领域，更具体涉及一种广谱抑菌活性的多粘类芽孢杆菌DYr4.4，同时还涉及一种广谱抑菌活性的多粘类芽孢杆菌DYr4.4的制备方法，再涉及一种广谱抑菌活性的多粘类芽孢杆菌DYr4.4的用途。

背景技术

梨树锈病由担子菌门胶锈菌属梨胶锈菌(Gynmosporangium haraeanum Syd.＝Gynmosporangium asiaticum Miyabe ex Yamada)引起，在中国梨园内发生较为普遍，可以导致叶片和果实脱落，严重影响产量。目前中国主要采用化学药剂进行防治，如代森锰锌、烯唑醇、三唑酮等，生物防治除了有报道采用梨胶锈菌重寄生菌(葡酒锈生座孢Tuberculina vinosa Sacc.)进行防治外，尚无商品化的生防制剂。长期施用化学农药可以导致农残超标，并易使病原菌产生抗药性，导致防治效果下降。此外，长期、反复和大量使用化学农药可引起土壤、水体和大气的污染，同时也杀伤了其他有益微生物，破坏了生态平衡。从植物内筛选利用有益微生物，抑制病原菌的生长进行防病具有显著的经济和生态效益。

目前，抗病微生物以芽孢杆菌为主，已经发现具有防病潜力的芽孢杆菌主要包括枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、解淀粉芽孢杆菌(B.amyloliquefaciens)、蜡样芽孢杆菌(B.cereus)、巨大芽孢杆菌(B.megaterium)、短小芽孢杆菌(B.pumilis)、多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)、侧胞芽孢杆菌(B.laterosporus)等，但这些芽孢杆菌主要用于防治由曲霉、镰孢菌、链格孢、轮枝孢和腐霉菌引起的作物根部的病害如立枯病、猝倒病、枯萎病、根腐病、茎腐病、立枯病【Kabaluk T,Gazdik K:Directory of MicrobialPesticides for Agricultural Crops in OECD Countries.Agriculture and Agri-Food.http://www4.agr.gc.ca/resources/prod/doc/pmc/pdf/micro_e.pdf 2005,accessed November2014】，没有涉及象梨树锈病这类作物叶部病害的防治。其中，多粘类芽孢杆菌已经在美国(登记公司American Agritech)和韩国(登记公司Green BiotechCompanyLtd.)登记，前者登记用于防治作物的立枯病和猝倒病，后者登记用于防治黄瓜猝倒病；在我国，多粘类芽孢杆菌(菌株HY96-2)也已经商品化，产品为0.1亿cfu/g多粘类芽孢杆菌细粒剂(商品名：康地蕾得，登记公司为浙江桐庐汇丰生化有限公司)，登记用于防治番茄、辣椒、茄子及烟草草青枯病【LI Yuan-guang(李元广)，WANG Wei(王伟)，SHE Guo-min(沈国敏)，et a1.Microbial preparationmethod for preventing and curing thebacterial wilt the plant and its use(防治植物细菌性青枯病的微生物制剂和方法及其用途)：CN1415737[P].2003-05-07；LI Yuan-guang(李元广)，WEI Hong—gang(魏鸿刚)，SHEN Guo-min(沈国敏)，et a1.Preparation and application of Paenibacilluspolymyxa wettable powder formulation(多粘类芽胞杆菌可湿性粉剂、及其制备和应用)：CN101243801[P].2008-08-20】。此外，国内也有报道还未商业化但有防病潜力的多粘类芽孢杆菌菌株，如S960菌株对瓜枯萎病菌和番茄疫霉具有明显的拮抗作用【林茂兹，多粘类芽孢杆菌S960菌株发酵条件优化，福建师大福清分校学报，2015,132(5):6-11】；多粘类芽孢杆菌LM-3对水稻稻瘟病具有一定的防效；多粘类芽孢杆菌CF05对番茄灰霉病菌、串珠镰刀病菌、棉花枯萎病菌等8种真菌和葡萄根癌病菌、白菜软腐病菌等4种细菌具有拮抗活性【金莉萍，多粘类芽孢杆菌生防促生机制研究及发酵条件的优化，硕士论文，2016，浙江农林大学】；JW-725对柑橘青霉具有很强的抑制作用【赵德立等.多粘芽孢杆菌JW-725抗菌活性物质及其发酵条件的初步研究.植物保护,2006.32(1)：47-50】；多粘类芽孢杆菌DN-1对油茶炭疽病有29.8％-68.91％的防效【胡飞等，一株多粘类芽胞杆菌防治油茶炭疽病初探，中国森林病虫，2015，34(4)：1-5】，并对水稻纹枯病菌具有显著的抑制效果【周子燕等，几种因素对多粘类芽孢杆菌DN-1活性的影响，安徽农业科学，2017,45(9)：137-138】。但目前尚无报道多粘类芽孢杆菌用于防治梨锈病等梨树病害。