[发明专利]靶向PD-L1的T和NKT混合细胞、制备方法和应用在审
| 申请号： | 201810203095.5 | 申请日： | 2018-03-13 |
| 公开（公告）号： | CN108484775A | 公开（公告）日： | 2018-09-04 |
| 发明（设计）人： | 张嵘;焦顺昌;周子珊;解佳森;王海燕 | 申请（专利权）人： | 北京鼎成肽源生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C07K19/00 | 分类号： | C07K19/00;C12N15/62;C12N15/867;C12N5/10;A61K35/17;A61P35/00 |
| 代理公司： | 北京兆君联合知识产权代理事务所(普通合伙) 11333 | 代理人： | 胡敬红 |
| 地址： | 102206 北京市*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 混合细胞 制备方法和应用 靶向 细胞杀伤能力 细胞 病毒质粒 嵌合抗原 杀伤能力 合成 感染 | ||
1.嵌合抗原受体anti-PDL1-CD8-41BB-CD3ξ，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.嵌合抗原受体anti-PDL1-CD8-41BB-CD3ξ的表达载体，由权利要求1所述的嵌合抗原受体anti-PDL1-CD8-41BB-CD3ξ连接于哺乳动物的慢病毒表达载体而得到。
3.根据权利要求1所述的表达载体，所述慢病毒表达载体为pCDH-MSCV-EF1-GFP或pLVX-EF1。
4.嵌合抗原受体anti-PDL1-CD8-41BB-CD3ξ的表达细胞，为T和NKT混合细胞，由权利要求2或3所述的嵌合抗原受体anti-PDL1-CD8-41BB-CD3ξ的表达载体感染PBMC细胞后经培养而得到。
5.根据权利要求4所述的的表达细胞，所述混合细胞中99.6％的细胞为T细胞，17.5％的细胞为NKT细胞。
6.根据权利要求4所述的的表达细胞，所述培养的顺序方法为:
1)以PBS将培养基OKM25稀释100倍备用，6孔板中加入2mL稀释过的OKM25，室温6h后，弃上清，备用；
2)将感染第二天的PBMC转入OKM25预包板的6孔板，补2mL培养基OKM100+12％FBS，37℃5％CO2培养；
3)5天后，将细胞全部转移至培养瓶中，以培养基OKM100+12％FBS调整细胞密度在1×106cells/mL；
5)3天后，将细胞转移至培养瓶中，培养基为OKM200+5％FBS，再培养4-8天即可得T+NKT混合细胞。
7.权利要求4－6任一所述嵌合抗原受体anti-PDL1-CD8-41BB-CD3ξ的表达细胞在制备杀死PDL1+细胞的药物中的应用。
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