[发明专利]母猪MMP2基因在促进卵巢颗粒细胞中E2生成的应用

说明书

本发明公开一种母猪MMP2基因在促进卵巢颗粒细胞中E2生成的应用，属于基因工程和细胞工程技术领域。本发明以MMP2基因为研究对象，采用了细胞生物学方法研究其在猪卵巢颗粒细胞中的表达应用。本发明第一次证实猪MMP2基因在猪卵巢颗粒细胞中的表达情况；以及在猪卵巢颗粒细胞中超表达或者干扰MMP2后，对母猪卵巢颗粒细胞的影响；在颗粒细胞中MMP2基因启动子缺失片段的活性。

技术领域

本发明属于基因工程和细胞工程技术领域，具体涉及一种母猪MMP2基因在促进卵巢颗粒细胞中E2(雌二酮)生成的应用。

背景技术

卵巢是哺乳动物重要的生殖腺，是卵泡发育和排卵的重要繁殖器官。卵泡作为卵巢的基本组成单位，维持着卵子的存在、发育与闭锁。颗粒细胞是卵泡周围扁平或立方状细胞，其生长与分化在卵泡的发育过程中起着重要的调控作用。卵泡的发育过程伴随着颗粒细胞生长、发育和分化，颗粒细胞的增殖和凋亡与卵泡发育卵母细胞的成长发育、原始卵泡生长的启动、生长期卵泡发育的调控以及卵泡闭锁密切相关。

基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases，MMPs)是一类重要的锌离子水解酶，主要功能是降解细胞外基质(extracellular matrix，ECM)，调节细胞粘着，可以作用于细胞外成分或其它蛋白成分而启动潜在的生物学功能，直接或间接参与胚胎发育、角膜修复、骨生长、组织重塑、血管形成及创伤愈合等正常生理过程以及炎症、肿瘤的侵袭转移等病理过程。迄今在人类至少已发现有种之多,构成MMPs超家族。依据MMPs各成员均有特异的底物将其分为五类：(1)胶原酶，其作用底物主要为间质胶原；(2)明胶类，其作用底物主要是Ⅳ型胶和明胶；(3)基质溶胶，可降解Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、型胶原和基质中的蛋白多糖和糖蛋白，并能激活某些MMP；(4)模型胶，能降解几种ECM成分，有些可激活其他MMP；(5)其它类，较复杂，有些底物不详。组织金属蛋白酶抑制剂(tissue inhibitor of metalloproteinases，TIMPs)是其天然抑制物两者在肿瘤发生过程中起着重要的作用。

MMP2是MMPs家族的重要成员，定位于人类染色体16q21，由13个外显子和12个内含子所组成，它不仅能水解变性胶原及细胞外基底膜中的主要成分Ⅳ型胶原，MMP2表达和功能的调节发生于转录、分泌、前酶原的激活、细胞表面的结合以及与来源于肿瘤或宿主细胞的抑制剂的相互作用等多个不同的水平。MMP2在肿瘤细胞的增殖、血管生成、浸润转移中有重要作用，除了降解基底膜型胶原外，还可以分解多种重要的生物活性分子结合蛋白，使生物活性分子游离而发挥作用。

发明内容

为了克服现有技术的缺点与不足，本发明的首要目的在于提供一种母猪MMP2基因在促进卵巢颗粒细胞中E2生成的应用。

本发明的另一目的在于提供抑制MMP2基因的RNA小干扰片段(siRNA)。

本发明的另一目的在于提供所述的MMP2基因的核心启动子区。

本发明的再一目的在于提供所述的MMP2基因的核心启动子区的应用。

通过基因工程技术构建该基因启动子区的缺失片段，分析各启动子区缺失片段的活性，找出其核心启动子区。

本发明的目的通过下述技术方案实现：

本发明提供一种母猪MMP2基因在促进卵巢颗粒细胞中E2生成的应用。过表达MMP2基因后能促进E2的生成，干扰MMP2基因后抑制E2的生成。

本发明提供一种抑制MMP2基因的siRNA，序列如下：

MMP2-siRNA-2：5′-GCGACAAGAAGUACGGCUU-3′；

MMP2-siRNA-3：5′-GCAAACAGGACAUCGUCUU-3′；

本发明提供一种MMP2基因的核心启动子区，其位置位于-1145～-686bp区域。