[发明专利]一种紫果西番莲顶梢的组培育苗方法

说明书

一种紫果西番莲顶梢的组培育苗方法，该方法包括外植体抗褐化、消毒处理、腋芽初诱导培养、愈伤组织诱导培养、继代增殖培养、生根诱导培养和瓶苗移栽技术环节；以幼嫩顶梢为外植体，用抗氧化剂Vc和柠檬酸混合溶液浸泡，又用高锰酸钾溶液浸泡杀菌，提高幼嫩外植体的抗氧化、抗褐变的能力和活力；在腋芽初诱导、愈伤组织诱导和继代增殖培养3阶段培养基中添加活性炭和聚乙烯吡咯烷酮吸附分泌的有害物质和抑制褐变物质产生。采用本方法，可将西番莲顶梢初诱导污染率、褐化率控制在10%以下；顶梢初诱导成活率达90%以上，丛生芽继代增殖系数5.0以上，生根率90%以上；瓶苗移栽成活率达95.0%以上。本发明能满足工厂化育苗的需要。

技术领域

本发明涉及作物的栽培技术，尤其涉及紫果西番莲顶梢的组培育苗方法。

背景技术

西番莲(学名:Passiflora caerulea L.)，为多年生常绿攀缘木质藤本植物，是一种芳香可口的水果，有果汁之王的美誉。其果实内含有丰富的钙、铁、磷等微量元素及17种氨基酸等物质，除食用外，还具有良好的保健和药用功效。据测定，西番莲果实含有超过135种以上的芳香物质，最适于加工成果汁。但种植西番莲病害较严重，主要有根腐病、疫霉病、炭疽病和花叶病等，特别是在多年生果园中，病害越发严重，造成落果和残次果增多，对果园产量和品质产生严重影响。研究表明，西番莲病害主要与幼苗自身携带的百香果花叶病毒CMV和木质化病毒PWV有关，最佳解决途径是采取组培的方式培育脱毒幼苗。

西番莲组培育苗有较多报道。国外以叶为外植体主要开展了西番莲、木栓西番莲、臭味西番莲、黄果西番莲等种类的组织培养，多数以MS为基本培养基。研究表明：在相同激素配方下，不同种类的诱导分化情况不同，例如用1mg.L^-1细胞分裂素6-BA与1mg.L^-1生长素NAA组合后,西番莲、木栓西番莲在试管内可形成芽及梢，而臭味西番莲却只长根,黄果西番莲仅有愈伤组织产生。程治英等（1986）对紫果西番莲叶片、茎段也采用MS培养基开展组织培养，研究表明：丛生芽分化仅在2～4mg.L^-16-BA与0.4mg.L^-1IAA组合中见到，分化率仅有5～20%；6-BA浓度降到0.5mg.L^-1以下后，有利于芽丛长高形成无根苗；根诱导最佳培养基为1/8MS，添加浓度均为0.2mg.L^-1IAA和NAA，生根率为67.0%。韦经杰等（CN1O579464OA）公开了一种黄金百香果茎段的组培育苗方法，认为在MS培养基中添加0.05～0.35mg.L^-1IAA、12～22 mg.L^-1亮氨酸和1.5～3.5 g.L^-1甘油后，有利于丛生芽诱导培养；在MS培养基中添加0.2～0.55mg.L^-1IAA、0.5～3.0 mg.L^-1NAA、15～50 mg.L^-1亮氨酸和2.5～5.0 g.L^-1甘油后，有利于丛生芽继代增殖培养；在MS培养基中添加1.2～4.5mg.L^-1IAA、1.5～4.0 mg.L^-1NAA、35～80 mg.L^-1亮氨酸和8～12g.L^-1甘油，有利于无根苗炼苗培养。用重量比2∶1.5∶3的蘑菇菌包、有机肥和风干塘泥为基质，用壮苗后的无根苗瓶外生根。Robles(1978)对贡呆西番莲和密柔毛西番莲的腋芽进行试管培养,结果表明，Nitsch、Blaydes和MS培养基均能诱导腋芽分化愈伤组织，加入2mg.L^-1Kt效果最好。张玉薇（CN106106175A）

认为在MS培养基中添加0.25～0.3mg.L^-1NAA和0.35～0.5mg.L^-16-BA后，有利于腋芽分化不定芽，在1/2MS培养基中添加0.25～0.3mg.L^-1NAA和0.35～0.5mg.L^-1赤霉素后，有利于无根苗生根；最后在MS培养基中添加0.25～0.3mg.L^-1NAA有利于生根苗壮苗培养。此外还有利用种子、花药开展组培育苗的研究报道。