[发明专利]一种叶酸代谢能力基因分型的试剂盒、检测方法及其应用

说明书

本发明涉及叶酸代谢能力基因分型检测技术，具体涉及一种叶酸代谢能力基因分型的试剂盒、检测方法及其应用，所述试剂盒包括针对MTHFR基因677C＞T突变、1298A＞C突变，以及MTRR基因66A＞G突变的特异性引物和特异性突变检测探针；RT‑PCR反应buffer；RT‑PCR反应Taq酶；灭菌纯水；阴性质控品；野生型质控品；突变型质控品以及分隔并包装试剂瓶或管的包装盒。本发明对叶酸代谢能力相关基因突变的检测方法具有特异性强、灵敏度高、受污染小、操作简单快速、安全性能高等优点，检测结果具有较好的准确性和重复性，尤其适合直接以全血作为检测样本，直接进行相关基因突变检测，不需提取基因组DNA模板。可以精准的对叶酸代谢能力进行判断，提供个体化叶酸服用和增补剂量，具有重要价值。

技术领域

本发明涉及叶酸代谢能力基因分型检测技术，具体涉及一种叶酸代谢能力基因分型的试剂盒、检测方法及其应用。

背景技术

叶酸是一种从菠菜中发现的水溶性维生素，又称之为维生素B9。随后，科学家发现各种动植物类食品中均含有叶酸，这类叶酸被称之为天然叶酸。通过饮用食物，尤其是绿叶蔬菜类，人体可以获得叶酸的补充。除此之外，还可以通过服用合成的叶酸片，增补叶酸，其生物利用度更高，约为天然叶酸的一倍。叶酸对细胞的分裂生长及核酸、氨基酸、蛋白质的合成起着重要的作用，同时也是胎儿生长发育不可缺少的营养素。

我国是新生儿出生缺陷的高发国家之一，每年的出生缺陷儿数量约占全世界的20％。据中国疾病预防控制中心统计资料显示，我国每年约有80万-120万名出生缺陷儿，平均每30秒就有一名缺陷儿出生。科学研究已经表明，叶酸缺乏是导致新生儿出生缺陷的主要原因。

同时由中华医学会心血管分会高血压学组与精准心血管病学学组以及中国医师协会高血压专业委员会三大组织联合发布的《H型高血压诊断与治疗专家共识》指出，叶酸缺乏和(或)同型半胱氨酸(Hcy)/叶酸代谢途径中关键酶的缺陷或基因突变是导致血Hcy水平升高的主要原因，Hcy≥10μmol/L是高血压重要的危险分层因素。共识还指出，叶酸代谢过程中的关键酶即亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因的677TT基因型在中国人群中频率高于其他国家人群，该基因型在血压增高的同时会大大增加脑卒中发生的危险。

尽管目前的循证医学证据支持补充叶酸这样一种疾病预防策略，但在临床实践中，针对补充叶酸的方法、剂量、持续的时间、患者的随访等方面还存在很多困惑。叶酸代谢能力受遗传因素影响，目前已经得到证实并且机理研究清楚的与叶酸代谢相关的基因主要是MTHFR和MTRR(甲硫氨酸合成酶还原酶)，不同的基因分型对应的叶酸补充剂量不一致，这导致个体化的补充叶酸成为预防策略的重中之重。

因此，高效、准确的检测判断叶酸代谢能力基因分型就显得极为重要，同时也成为指导个体化增补叶酸的关键。目前检测叶酸代谢能力相关基因突变的方法主要有测序法、基因芯片法、荧光PCR法、高分辨率熔解曲线法以及PCR-RFLP等，其中以荧光PCR法最为常用且具实用性。荧光PCR法又分为PCR-荧光染料法和PCR-荧光探针法，在实际应用中，PCR-荧光探针法的特异性高于PCR-荧光染料法，因此，PCR-荧光探针法更适合用于检测叶酸代谢能力基因分型。

但是，现有的技术中，荧光PCR法检测叶酸代谢能力基因分型，需要提取血液基因组DNA作为模板，进行相应的检测，这一操作大大的增加了检验操作人员的工作量，且增加了检测成本和时间。另外，现有的荧光PCR法检测叶酸代谢能力基因分型，多是针对每个位点设置一个检测管，如检测一个样本MTHFR基因677C>T突变、MTHFR基因1298A>C突变以及MTRR基因66A>G突变共三个位点，则需分别设置三个检测管，进行相应检测，操作费时费力，不利于临床大规模推广使用。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明的目的是提供一种叶酸代谢能力基因分型检测的试剂盒、方法及其应用，所述试剂盒能够快速有效的检测叶酸代谢能力基因分型，为个体化增补叶酸的指导奠定了基础。