[发明专利]蒙古沙冬青叶绿体ω-3脂肪酸脱饱和酶AmFAD7编码基因与应用

权利要求书

1.提高植物抗旱性和抗寒性的蒙古沙冬青叶绿体ω-3脂肪酸脱饱和酶基因AmFAD7，所述蒙古沙冬青叶绿体ω-3脂肪酸脱饱和酶基因AmFAD7 的全长cDNA序列如SEQ ID No. 2所示。

2.含有权利要求1所述蒙古沙冬青叶绿体ω-3脂肪酸脱饱和酶基因AmFAD7的载体。

3.蒙古沙冬青叶绿体ω-3脂肪酸脱饱和酶基因AmFAD7在提高植物抗旱性和抗寒性中的应用，所述蒙古沙冬青叶绿体ω-3脂肪酸脱饱和酶基因AmFAD7 的全长cDNA序列如SEQID No. 2所示，所述植物是拟南芥。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于所述蒙古沙冬青叶绿体ω-3脂肪酸脱饱和酶基因AmFAD7的序列是如SEQ ID No. 4所示的gDNA序列。

5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于所述蒙古沙冬青叶绿体ω-3脂肪酸脱饱和酶基因AmFAD7的序列是如SEQ ID No. 5所示cDNA编码区序列。

6.根据权利要求3所述的应用，其特征在于将所述AmFAD7基因构建到植物表达载体上，通过转化方法导入植物细胞或组织，获得具有抗干旱和抗寒特性的转基因植物。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于所述植物表达载体为p3300-35S-AmFAD7；所用转化方法为根癌农杆菌介导法。

8.蒙古沙冬青叶绿体ω-3脂肪酸脱饱和酶基因编码的AmFAD7蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID No. 3所示。

9.蒙古沙冬青叶绿体ω-3脂肪酸脱饱和酶基因AmFAD7的全长cDNA序列的获得方法，其特征在于所述方法包括如下步骤：

（1）总RNA提取：取蒙古沙冬青叶片为样品，用改进的Trizol法提取总RNA并进行纯化，然后保存于-76℃；其中，所述改进的Trizol法中，Trizol试剂加2%的β-巯基乙醇和pH 4.8的3 M KAc；

（2）3’RACE：根据如SEQ ID No.1所示的蒙古沙冬青叶绿体ω-3脂肪酸脱饱和酶基因AmFAD7 3’-端缺失的cDNA序列设计基因特异性3’RACE引物，取步骤（1）冻存的总RNA做模板，按照TaKaRa公司的3’RACE试剂盒说明书操作步骤扩增AmFAD7基因cDNA序列的3’-端；将所得3’-端序列与序列表中SEQ ID No.1所示的序列进行拼接，获得如序列表中SEQ IDNo.2所示的AmFAD7基因全长cDNA序列，

所述3’RACE引物为：

AmFAD7-Outer：5’-GATAATCAATGAGGCTAATGGGG-3’

AmFAD7-Inner：5’-AGAATCC TTGGAAGTCCATGAGC-3’。