[发明专利]一株泰妙菌素单克隆抗体杂交瘤细胞株及其应用

说明书

本发明公开了一株泰妙菌素单克隆抗体杂交瘤细胞株及其应用，属于食品安全免疫检测领域。本发明泰妙菌素完全抗原与等量弗氏佐剂混合乳化完全，通过背部皮下注射免疫BALB/c小鼠。首次免疫(100μg/只)用完全弗氏佐剂，多次加强免疫(50μg/只)用不完全弗氏佐剂，最后一次用泰妙菌素完全抗原(20μg/只，不含佐剂)冲击免疫。取高效价低IC₅₀小鼠的脾细胞，通过PEG方法与小鼠骨髓瘤细胞融合，经过间接竞争酶联免疫法筛选和三次亚克隆，得到一株杂交瘤细胞株。此细胞株分泌的单克隆抗体，对泰妙菌素具有较好的特异性和检测灵敏度(IC₅₀值为0.73ng/mL)，为食品中泰妙菌素残留的免疫检测提供了原料，具有实际应用价值。

技术领域

本发明涉及一株泰妙菌素单克隆抗体杂交瘤细胞株及其应用，属于食品安全免疫学检测技术领域。

背景技术

泰妙菌素(Tiamulin，TML)，又称硫姆林、泰妙霉素、泰妙灵、支原净、泰牧霉素，是一种截短侧耳素类动物专用抗生素，对支原体及某些革兰氏阳性菌具有良好的抗菌活性，还有促生长作用，在动物体内吸收迅速，体内分布广泛，因而作为兽药抗生素和饲料添加剂被广泛使用。但泰妙菌素在动物体内的残留可能对人类的健康造成严重的潜在威胁。欧盟、美国、日本都对动物源性食品中抗生素泰妙菌素最高残留限量(MRL)做出明确规定。我国农业部2002年第235号公告中规定了泰妙菌素的残留标识物包括泰妙菌素和其代谢产物8-α-hydroxymutilin，其在猪肉、鸡肉中的最高残留限量为100μg/kg。

为了有效监督监测食品中使用泰妙菌素的情况，需要寻找一种特异性好，灵敏度高的测定方法。目前，用于泰妙菌素残留检测的方法主要是一些理化检测方法，包括气相色谱法、液相色谱法、质谱法等。早期泰妙菌素被认为是大环内酯类抗生素，许多文献报道了泰妙菌素在内的大环内酯类抗生素的多残留分析，这些方法中多配合紫外或质谱检测器。理化检测方法虽然灵敏度高，但对操作人员专业性要求高、耗时较长、且仪器昂贵，免疫学检测方法具有快速灵敏、操作简单，高通量等特点，应用前景广阔，虽然免疫检测方法的建立需要较长时间，一旦制备出好的抗体，建立检测方法将对泰妙菌素的快速检测非常有利。

发明内容

本发明的目的是提供一株泰妙菌素单克隆抗体杂交瘤细胞株，由该细胞株制备的抗体对泰妙菌素具有较好特异性和检测灵敏度，可以用来建立泰妙菌素的免疫学检测方法。

本发明的第一个目的是提供一株单克隆细胞株，已于2017年9月5日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.14698，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。

本发明的第二个目的是提供一种检测泰妙菌素的方法，所述方法是利用所述的单克隆细胞株分泌产生的泰妙菌素单克隆抗体。

本发明的第三个目的是提供一种泰妙菌素单克隆抗体，由所述的单克隆细胞株所分泌产生。

本发明的第四个目的是提供所述的泰妙菌素单克隆抗体的应用，用于食品安全检测中泰妙菌素残留的分析检测。

本发明的第五个目的是提供一种试剂盒，含有所述的单克隆细胞株或所述的泰妙菌素单克隆抗体。

在本发明的一种实施方式中，所述试剂盒用于食品安全检测中泰妙菌素残留的分析检测。

本发明的第六个目的是提供所述的试剂盒在检测泰妙菌素含量中的应用。

本发明的第七个目的是提供所述的单克隆细胞株3B1的制备方法，所述方法基本步骤为：

1)半抗原的合成：