[发明专利]一种新型杀念珠菌多肽FCP1及其制备方法

说明书

本发明公开了一种杀念珠菌多肽序列和制备方法。该杀念珠菌多肽的氨基酸序列为：NH₂‑RILSILRHQ‑COOH。本发明的制备方法是采用固相多肽合成方法。本发明克服了常见抗菌肽生物安全性差、易溶血的缺点，是一种对念珠菌具有特异杀菌作用、不具有溶血性的新型抗真菌多肽。该多肽为临床抗真菌药物研究提供了一种新型先导物。

技术领域

本发明属于生物制剂，具体涉及一种新型杀念珠菌多肽及其制备方法。

背景技术

在世界范围内，随着免疫缺陷病人的增多，真菌感染的发病率增加，其中假丝酵母属(Candida spp)引起的许多临床疾病，与医疗机构的重大死亡率和发病率相关。研究表明，在侵染性真菌感染中，以念珠菌感染为主。由于抗生素的滥用，耐药性病原念珠菌越来越多。因此，尽快研究和开发新型、高效、低毒、病原真菌不易对其产生耐药性的抗真菌药物具有重要意义。

已有的研究表明，抗菌肽(AMP)被认为是新型抗菌药物开发中的先导化合物(LvY,et al.PLoS ONE,2014,9:e86364)。AMP生物体产生的先天免疫系统的重要组成部分，最显着的特征是广谱抗菌活性，包括对多重耐微生物的抗性。此外，大多数AMP与抑制特定生物合成途径(包括细胞壁或蛋白质合成)的传统抗生素不同，通过多靶点的作用机制抑制或杀死病原菌。抗菌肽独特的作用机制，致使微生物不易产生耐药性(Forde E,etal.Molecules,2015,20(1):1210-1227；王欢，等.细胞与分子免疫学杂志，2015，31(1):137-139)。因此，抗菌肽用来治疗人和动物的疾病在临床上有着极大的潜力，可能是解决真菌耐药性、药物毒副作用问题的最佳选择。

从总体上看，在发现的抗菌肽中，具有抗细菌活性的抗菌肽较多，而具有抗真菌活性的抗菌肽较少。在前期研究中，我们确定了一种新型抗真菌肽CGA-N46(李瑞芳，等.中山大学学报(自然科学版)，2006，45(2)：64-67)。CGA-N46对应于人嗜铬粒蛋白(CGA)N末端Pro31-Gln76序列，对白色念珠菌具有抗菌活性。

利用基因工程技术表达多肽，表达产物不稳定，易被降解，纯化困难。化学合成30个氨基酸以上多肽，产物产量低、纯度低。对CGA-N46进行生物信息学分析。根据抗菌肽结构特征和生物信息学特性，化学合成CGA-N46的衍生片段，并进行比较，以期获得活性高、生物特性好、便于人工合成对应于CGA N端Arg47-Glu55的抗真菌多肽FCP1，且其具有杀念珠菌作用。

发明内容

采用固相化学合成技术获得多肽FCP1，进行了抗真菌活性研究，发现其具有杀念珠菌活性。

对FCP1生物学特性进行研究，发现FCP1具有以下优点：(1)对念珠菌类病原真菌有特异的抑制作用，其中对热带念珠菌和新型隐球菌的增殖抑制作用最强，MIC₁₀₀为3.9μg/mL(4μmol/L)；(2)杀菌实验结果表明，经FCP1处理的念珠菌不能再在马铃薯培养基上生长，FCP1能够杀死念珠菌；(3)FCP1安全，在16倍MIC₁₀₀浓度条件下，对红细胞溶血率仅为1.32％。对FCP1进行生物信息学分析，发现FCP1呈α-螺旋构型。

常见α-螺旋形抗菌肽抗菌机制是通过板筒式模型或毯式模型使细菌细胞膜通透性增加，内容物外溢，达到抗菌目的。具有这种抗菌机制的抗菌肽多数具有溶血活性和哺乳动物细胞毒性。但FCP1在高出MIC₁₀₀浓度情况下，并不引起溶血(见表1)。因此，FCP1是一种安全的新型杀念珠菌多肽。

表1 FCP1杀念珠菌活性和细胞毒性

本发明克服了现有抗菌肽的不足，是一种安全的杀念珠菌多肽。本发明的第二个目的是提供了多肽FCP1的制备方法。

实验表明本发明是一种安全、特异的杀念珠菌多肽，其制备未见报道。

附图说明