[发明专利]关节液中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白在人工关节感染的检测及诊断试剂盒中的应用

说明书

本申请涉及关节液中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)在人工关节感染的检测及诊断试剂盒中的应用。关节置换术是治疗终末期关节疾病的有效治疗方式。但是关节假体周围感染是关节置换术后严重的并发症。关节液NGAL诊断人工关节感染具有较高的敏感性和特异性。用荧光颗粒作为标记物，通过免疫层析方法制备关节液NGAL的诊断试剂盒(试纸条)。应用免疫荧光定量分析仪，可以对关节液标本进行定量检测和即时检测，实现诊断人工关节感染。本申请中的关节液NGAL检测试剂和诊断试剂盒使用简单，反应灵敏，诊断准确性高。

技术领域

本发明涉及医学诊断领域，具体涉及关节液中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)在人工关节感染的检测及诊断试剂盒中的应用。

背景技术

人工关节置换术是治疗严重关节疾病的有效方法，但是人工关节感染(Prosthetic Joint Infection，PJI)是关节置换术后严重并发症之一，其发生率在初次关节置换手术约为1％～2％，翻修手术可达3％～10％。PJI的临床表现复杂，其诊断、治疗仍存在很多困难。根据美国骨科医师协会、感染病学会和肌肉骨骼感染学会提出的诊断指南，大部分PJI可以获得明确的诊断和及时的治疗。但是，也有一些临床表现不典型的病人，诊断十分困难。

现有的诊断标准依据临床表现和实验室检查综合判断，后者包括ESR、CRP、细菌培养、关节液WBC计数与分类等。这些指标在诊断PJI的特异性、敏感性仍存在一些不足：1、细菌培养是诊断PJI的“金”标准之一，但细菌培养阳性率为60％～70％左右，敏感性不够高。2、关节液白细胞计数与分类是诊断PJI的有效方法，但全身炎症性关节炎病人关节置换后，该指标也会升高，特异性不强。3、现有实验室诊断方法，无法做到即时诊断(Point of CareTesting，POCT，或称床边诊断)。因此，寻找一种快速简便、灵敏度高和特异性强的检测方法，对PJI的诊断有重要意义。

近年来，关节液中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)生物标志物在PJI诊断中受到关注。NGAL属于抗菌肽家族与脂质运载蛋白(lipocalin)家族，是中性粒细胞颗粒中的主要蛋白质，具有广谱的抗菌活性。现有关节液生物标志物检测多采用酶联免疫吸附法(ELISA)试剂盒，临床上需收集到一定数量的标本才能检测，价格高，无法满足临床个体化和POCT的需要。胶体金免疫标记技术是一种半定量技术，使用简便，但无法定量检测。免疫荧光层析技术是一种以独特荧光特性的镧系元素及其螯合剂作为示踪物的非放射性免疫标记技术，已经广泛应用于临床实验室和POCT诊断。因此，本项目将应用荧光颗粒作为标记物，通过免疫层析方法制备NGAL标志物的诊断试剂盒(条)，应用免疫荧光定量分析仪，可以对关节液标本定量检测和即时检测。

发明内容

本发明针对现有技术的不足，提供关节液中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)在人工关节感染的检测及诊断试剂盒中的应用。

本发明提供了一种定量检测关节液中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)的免疫荧光试纸条，所述试纸条包括反应膜1、样品垫2、吸收垫3和底板4；所述反应膜1位于所述底板4上，所述反应膜1上固定有检测带5和质控带6，所述样品垫2与所述反应膜1的一侧部分重叠并位于所述反应膜1和所述底板4上，所述吸收垫3与所述反应膜1的另一侧部分重叠并位于所述反应膜1和所述底板4上，所述样品垫2上包括加样点7；其中所述检测带包被有荧光颗粒标记的抗NGAL抗体，所述质控带包被有羊抗鼠IgG抗体。

在一个方面中，所述底板4的材料选自ABS、PS、PE、PVC或PC中的任意一种；所述样品垫2或吸收垫3的材料选自纤维素、玻璃纤维或纺织聚合物中的任意一种；所述反应膜1的材料选自硝酸纤维素膜、醋酸纤维素膜、尼龙膜或聚四氟乙烯膜中的任意一种。