[发明专利]一种中山杉初代培养快速萌发培养基

说明书

本发明涉及一种中山杉初代培养快速萌发培养基，包括诱导培养基和壮苗培养基；本发明提供的培养基营养成分丰富，适合中山杉的增殖和快速萌发，大大缩短了中山杉培养的周期，降低了生产成本；中山杉初代培养外植体的萌发率超过98％，平均萌发时间少于18d，萌发速率快；能够有效降低组培时外植体的褐化率，提高中山杉外植体的成活率，提高繁殖效率。

技术领域

本发明涉及中山杉组培技术领域，尤其涉及一种中山杉初代培养快速萌发培养基。

背景技术

中山杉为半常绿高大乔木，树干挺拔、树型优美，是北美落羽杉、墨西哥落羽杉、池杉3个树种的优良种间杂交种，由江苏省中国科学院植物研究所经多年试验研究后选育而成。具有绿期长、生长快、耐水湿、耐盐碱、抗风性强、病虫害少、适应性广、生长迅速、材质优良等比亲本更优良的特性。不仅是农田林网、滩涂造林的优良树种，而且在城市园林绿化、水源涵养、水土保持、绿色景观通道、生态建设等方面呈现广阔的发展前景。

当前，繁殖中山杉种苗的主要手段是扦插，它可使种苗保持母树的优良特性，但是中山杉种条木质化较早，扦插成活率低，且种条数量有限，速度慢，产苗率低，制约着中山杉的大面积推广种植。因此，通过组织培养繁殖是解决中山杉新优无性系扩繁的首选途径，而研究能够提高中山杉初代培养萌发速率的培养基是提高中山杉快速繁殖的当务之急。

发明内容

为了解决上述技术问题，提供一种能够提高中山杉萌发率、缩短平均萌发时间并降低褐化率的中山杉初代培养快速萌发培养基。

本发明提供以下技术方案：

一种中山杉初代培养快速萌发培养基，包括诱导培养基和壮苗培养基；通过诱导培养基能够有效诱导不定芽的发生，促进不定根的形成，减少萌发时间，提高中山杉的萌发率；壮苗培养基能够有效增强中山杉的增殖效果，提高中山杉组培的成活率；

其中所述诱导培养基的配方为2/3MS培养基+3-5mg/L的2,4-D+5-7mg/L的NAA+5-10mg/L的香蕉泥+0.01-0.05mg/L的TDZ+2-4mg/L的6-BA+10-20g/L的琼脂+0.02-0.06的有机质+4-6g的蔗糖+2-3mg/L的樟脑油；采用2/3培养基营养全面，其中TDZ具有很强的细胞分裂活性，促进植物芽的再生和繁殖，打破芽的休眼，与6-BA相互配合能够显著缩短丛芽诱导时间，同时与有机质和樟脑油的配合能够降低外植体褐化率，而其他组份之间的配合能够为中山杉外植体提供碳源以及生长平台，降低生产成本，提高初代培养的萌发率，缩短萌发时间。

所述壮苗培养基的配方为1/2MS培养基+10-30mg/L的复硝酚钠+10-30mg/L的抗坏血酸+5-10mg/L的GA+6-10mg/L的IAA+0.03-0.06mg/L的PVP+10-20mg/L的活性炭粉+2-4g/L的蔗糖+10-20g/L的琼脂；其中抗坏血酸为还原性物质，对组培的植体无副作用，能将氧化的醌还原为酚类物质，阻止醌类物质进一步自发聚合形成色素物质，PVP和活性炭粉的配合能够有效降低幼苗的褐化率，提高幼苗成活率；复硝酚钠和其他组分的配合能够提高中山杉幼苗的高度、叶片的数量、叶片的鲜重、根的质量和根的长度，提高中山杉移栽时的成活率，提高经济效益。

进一步的，所述有机质为谷胱甘肽还原酶和半胱氨酸的混合物，所述谷胱甘肽还原酶和半胱氨酸的质量比为2:1。谷胱甘肽还原酶能清除自由基和活性氧，也可以作为抗氧化剂，对酚类物质的氧化起抑制作用。半胱氨酸可通过与PPO活性位点的铜离子不可逆结合而抑制酶活性，或者替代PPO活性位点的组氨酸残基，降低中山杉外植体细胞破碎处的酚类与多酚氧化酶结合产生褐色的醌，降低褐化率。

更进一步的，一种中山杉初代培养快速萌发培养基的制备方法，包括以下步骤：

S1、将香蕉切成长度为1-1.5cm的立方体块状，按照配方量加水进行搅拌，得到香蕉泥备用；