[发明专利]一种检测氯菊酯的时间分辨荧光试纸条及其应用

说明书

本发明公开了一种检测氯菊酯的时间分辨荧光试纸条及其应用。试纸条包括样品吸收垫、反应膜以及吸水垫，反应膜位于中间，样品吸收垫与吸水垫分别搭接于反应膜左右两端；样品吸收垫上设有加样区和微球区，微球区上载有氯菊酯时间时间分辨荧光微球；反应膜上设有检测线(T线)和质控线(C线)，T线接上包被氯菊酯抗原(包被原)，C线包被抗兔抗体。本发明还提供了一种应用上述氯菊酯试纸条检测苹果、玉米、茶叶、西红柿、菠菜、白菜等样品中氯菊酯残留的方法。本发明所提供的试纸条具有操作简单、灵敏度高、定量检测、快速检测、成本低等特点，适合大量样本的筛查和现场监控。

技术领域

本发明涉及一种检测氯菊酯的时间分辨荧光试纸条及其应用，属于时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)技术领域，用于苹果、玉米、茶叶、西红柿、菠菜、白菜等样品中氯菊酯的含量检测。

背景技术

氯菊酯，又名苄氯菊酯、除虫精、百灭灵，是一种不含氰基结构的拟除虫菊酯类杀虫剂。作为菊酯类杀虫剂中第一个适用于防治农业害虫的不稳定性杀虫剂，氯菊酯具有较强的触杀和胃毒作用，可以用于防治棉花、蔬菜、茶叶、果树上多种害虫，尤其适用于卫生害虫的防治。菊酯类农药与有机氯农药相比，对环境的污染较小，但它可通过食物链进入机体，从而对哺乳动物造成生殖、免疫和心血管等毒副作用，同时也会造成环境污染。因此，我国相关质检部门对该物质进行了限量规定。GB 2763-2016《食品安全国家标准食品中农药最大残留限量》规定了氯菊酯的最大残留限量：谷物(部分)和大豆均为2mg/kg，蔬菜中大白菜、结球甘蓝均为5mg/kg，水果中柑橘类、果仁类、核果类、瓜果类等均为2mg/kg，茶叶为20mg/kg。

目前，检测氯菊酯的方法有气相色谱法、气相色谱-质谱法、液相色谱-串联质谱法等。仪器检测方法的精确度较高，但是仪器昂贵，需要专业的技术人员，检测步骤复杂，难以批量检测样品，不适用于基层实验室批量、快速检测样品。而免疫学检测方法操作简单、快速、灵敏，可同时检测多数样品，是理想的快速筛选手段。

发明内容

本发明的目的是提供一种灵敏度高、操作简单、成本低、检测时间短的氯菊酯时间分辨荧光试纸条。

本发明所提供了一种氯菊酯时间分辨荧光试纸条，该试纸条包括样品吸收垫、反应膜以及吸水垫三部分。反应膜位于中间，样品吸收垫与吸水垫分别搭接于反应膜左右两端。其中，样品吸收垫上设有加样区和微球区，微球区上载有时间分辨荧光微球；反应膜上设有检测线(T线)和质控线(C线)，T线接上包被氯菊酯抗原，C线包被抗兔抗体。

所述氯菊酯时间分辨荧光微球，包括检测微球和质控微球，检测微球为表面包被有氯菊酯单克隆抗体的荧光微球，质控微球为表面包被有兔抗标记蛋白的荧光微球。

所述荧光微球中填充了斓系元素化合物；较优的，该斓系元索鳌合物为铕鳌合物；最优的，该铕鳌合物可为Eu(TTA)3/TOPO或Eu(TTA)3/Phen。

所述蛋白可以是牛血清Y-球蛋白(BGG)或小牛血清白蛋白(BSA)。

所述时间分辨荧光微球粒径范围为100-1000nm。

所述硝酸纤维素膜上，T线上包被的抗体为氯菊酯抗原，C线上包被的抗兔抗体。

所述氯菊酯时间分辨荧光免疫定量检测试纸条底部设有塑料底板。

所述T线接上包被氯菊酯抗原是由氯菊酯半抗原与载体蛋白偶联得到，所述载体蛋白可为牛血清白蛋白、卵清蛋白、血蓝蛋白、甲状腺蛋白、人血清白蛋白。

所述氯菊酯单克隆抗体是以氯菊酯半抗原-载体蛋白偶联物作为免疫原制备获得，是由氯菊酯单克隆抗体杂交瘤细胞株分泌获得；所述抗兔抗体是将兔源抗体免疫羊得到。

所述样品吸收垫为Fusion5膜或其他功能相同的膜；所述吸水垫为吸水垫；所述反应膜可为硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜。