[发明专利]一种高乙醛耐受性的壳聚糖固定化醛缩酶的制备方法与应用

权利要求书

1.一种高乙醛耐受性的壳聚糖固定化醛缩酶的制备方法，其特征在于，它的步骤如下：

(1)取0.5g天然多糖物质溶于30ml，1wt％-3wt％的乙酸溶液中，静置2.0h，充分溶解，形成胶状溶液，用针形注射器将胶状溶液滴加到凝结剂(1mol/L的NaOH)中形成球形颗粒，注射器的针头距离凝结剂液面5cm，速度40-60滴/分钟，用去离子水洗至中性，干燥备用；

(2)取步骤(1)中制备的固定颗粒0.5g，加入至15,0ml pH＝7.4的磷酸缓冲溶液中，加入2.0-10.0mg的活化剂，活化10-60min，再加入2.0-8.0ml浓度为0.05wt％戊二醛溶液，交联0.5-2.0h，获得载体；

(3)配置1.0mg/ml的醛缩酶蛋白溶液，加入载体，醛缩酶蛋白与载体的质量比为1:1～1:10，室温下，pH调整至7.0，固定0.5-2.0h，离心后，用去离子水洗涤固定化酶，得到高乙醛耐受性的壳聚糖固定化醛缩酶。

2.根据权利要求1所述的一种高乙醛耐受性的壳聚糖固定化醛缩酶的制备方法，其特征在于，所述的天然多糖物质为壳聚糖(脱乙酰度>98％，分子量1.05×10⁶)。

3.根据权利要求1所述的一种高乙醛耐受性的壳聚糖固定化醛缩酶的制备方法，其特征在于，所述的活化剂为1-乙基-3-(3-甲基氨基)丙基碳二亚胺(简称EDC)。

4.根据权利要求1所述的一种高乙醛耐受性的壳聚糖固定化醛缩酶的制备方法，其特征在于，所述的醛缩酶为来源于Escherichia coli K12AB200068的2‐脱氧‐D‐核糖‐5‐磷酸醛缩酶。

5.权利要求1所述方法制备得到的壳聚糖固定化醛缩酶在催化2-脱氧-D-核糖-5-磷酸，以获得3-磷酸甘油醛和乙醛中的应用。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，具体为：(4)将10mg固定化醛缩酶在300mM的乙醛浓度下孵育1h-6h，再加入到1.0ml的50mM的三乙醇胺盐酸盐溶液中，25℃下反应。所述三乙醇胺盐酸盐溶液pH为7.5，含0.1mmol的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸，0.4mmol的底物2-脱氧-D-核糖-5-磷酸，4U/ml磷酸丙酮异构酶，11U/ml甘油磷酸脱氢酶。