[发明专利]与水稻饭味相关QTL紧密连锁的分子标记及其筛选方法

权利要求书

1.一种与水稻饭味相关QTL紧密连锁的分子标记，其特征在于，所述分子标记的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO:1所示。

2.根据权利要求1所述与水稻饭味相关QTL紧密连锁的分子标记，其特征在于，所述分子标记的引物为：

正向引物：ATCGTCCACTCAGCTGAGCT

反向引物：CAACACGTCGTTTCCGGTTT 。

3.一种筛选与水稻饭味相关QTL紧密连锁的分子标记的方法，其特征在于，应用于权利要求1-2任一所述的与水稻饭味相关QTL紧密连锁的分子标记的筛选，包括如下步骤：

(1)构建F4代分离群体：父本、母本杂交获取F1后单粒传获得F4代群体；

(2)提取父母本、F1代、F4代个体基因组DNA备用；

(3)对F4群体进行基因分型，获取基因型数据，构建遗传连锁图谱；

(4)利用遗传连锁图谱结合表型数据进行QTL分析，定位水稻饭味相关QTL；

(5)开发与水稻饭味相关QTL紧密连锁的分子标记：选择靠近上述饭味相关QTL所在区段的分子标记，通过PCR扩增和琼脂糖凝胶电泳检测来筛选具有多态性并扩增稳定的分子标记；

(6)制备分子标记：以父本、F1代或F4代的基因组DNA作为模板，以分子标记扩增引物对进行PCR扩增。

4.根据权利要求3所述的筛选与水稻饭味相关QTL紧密连锁的分子标记的方法，其特征在于，步骤(1)具体包括：

父本和母本杂交得到F1，F1套袋自交得到F2，F2通过单粒传加两代，得到F4；所述父本为育种材料SKO,所述母本为晚97香。

5.根据权利要求3所述的筛选与水稻饭味相关QTL紧密连锁分子标记的方法，其特征在于，步骤(2)基因组DNA提取具体包括步骤：

a,称取新鲜叶片，剪碎研磨后加入1.5×CTAB，研磨成匀浆转入离心管中，继续用1.5×CTAB冲洗研钵后转入离心管中，65℃水浴后加入去离子水，使用前再加入巯基乙醇；

b，冷却至室温后加入等体积氯仿/异戊醇，混匀至下层液变为深绿色；

c，离心后将上层水相移到新的离心管，加入2倍体积预冷的无水乙醇，放置沉淀DNA；

d，离心后弃掉上清，加入75％乙醇洗涤沉淀1次，倒置离心管干燥DNA，加入TE溶解DNA；

e，用0.8％的琼脂糖凝胶检测基因组DNA，将得到的父母本以及F1代、F4代个体的基因组DNA储存备用。

6.根据权利要求3所述的筛选与水稻饭味相关QTL紧密连锁分子标记的方法，其特征在于，所述步骤(4)包括：根据F4群体的个体表型，分别标记与父本型性状相似的、与母本型性状相似的、性状居于父本和母本之间的个体表型，将个体的表型数据与基因型数据进行比较，将饭味相关基因定位在遗传连锁图谱上。

7.根据权利要求3所述的筛选与水稻饭味相关QTL紧密连锁分子标记的方法，其特征在于，所述步骤(6)中PCR反应体系如下：

。

8.根据权利要求7所述的筛选与水稻饭味相关QTL紧密连锁分子标记的方法，其特征在于，所述步骤(6)中PCR反应条件为：94℃预变性5分钟，94℃变性30秒，60℃退火30秒，72℃延伸40秒，运行35个循环；最后72℃延伸3分钟。