[发明专利]一种融合表达抗菌肽与红色荧光蛋白的工程菌构建方法

说明书

本发明公开了一种融合表达抗菌肽与红色荧光蛋白的工程菌构建方法，在基因工程生产阳离子抗菌肽LfcinB的过程中,将mApple融合头基因与抗菌肽基因连接，构建重组质粒，电转化酿酒酵母W303感受态细胞；使用的技术是PCR、限制性内切酶酶切、连接酶连接和转化等基因工程技术；阳离子抗菌肽是指带有净正电荷的具有抗菌活性的多肽；所使用的载体质粒是携带有酿酒酵母α信号肽基因的质粒pYES2‑α。该酿酒酵母工程菌融合了表达抗菌肽和红色荧光蛋白，让酿酒酵母工程菌具有选择性免疫激活和调节功能，对败血症有良好的预防和保护作用，还可以通过红色荧光蛋白调节酒的不同颜色。

技术领域

本发明涉及一种酿酒酵母工程菌，具体涉及一种融合表达抗菌肽与红色荧光蛋白的工程菌构建方法。

背景技术

酿酒酵母是一类单细胞微生物，结构简单，属于真菌类。酿酒酵母具有个体大，蛋白质含量高，杂食性强，易分离，易培养，代谢产物多，综合利用广等特点，在酿酒工业中得到了广泛研究和应用。又称面包酵母或者出芽酵母。酿酒酵母是与人类关系最广泛的一种酵母，不仅因为传统上它用于制作面包和馒头等食品及酿酒，在现代分子和细胞生物学中用作真核模式生物，其作用相当于原核的模式生物大肠杆菌。酿酒酵母是发酵中最常用的生物种类。酿酒酵母的细胞为球形或者卵形，直径5–10μm。其繁殖的方法为出芽生殖。但是现有的酿酒酵母不能融合表达抗菌肽和红色荧光蛋白，不能对败血症有良好的预防和保护作用，也不能通过红色荧光蛋白调节酒的不同颜色。

发明内容

本发明的目的就在于为了解决上述问题而提供一种融合表达抗菌肽与红色荧光蛋白的工程菌构建方法，从而解决上述问题。

为了解决上述技术问题，本发明提供了如下的技术方案：

本发明提供了一种融合表达抗菌肽与红色荧光蛋白的工程菌构建方法，在基因工程生产阳离子抗菌肽LfcinB的过程中, 将mApple融合头基因与抗菌肽基因连接，构建重组质粒，电转化酿酒酵母W303感受态细胞；使用的技术是PCR、限制性内切酶酶切、连接酶连接和转化等基因工程技术。

作为本发明的一种优选技术方案，阳离子抗菌肽是指带有净正电荷的具有抗菌活性的多肽。

作为本发明的一种优选技术方案，所使用的载体质粒是携带有酿酒酵母α信号肽基因的质粒pYES2-α。

作为本发明的一种优选技术方案，构建表达重组阳离子抗菌肽LfcinB酿酒酵母基因工程菌的特征是：

（1）含有核苷酸序列：

SEQ ID ：NO 1：

TTTAAATGTAGAAGATGGCAATGGAGAATGAAAAAATTGGGTGCTCCATCTATTACTTGTGTTAGAAGAGCTTTT

SEQ ID ：NO2：