[发明专利]整合包含BCN基团的氨基酸到多肽中的方法

权利要求书

1.一种制备包含BCN基团的多肽的方法，所述方法包括将包含BCN基团的氨基酸遗传整合到多肽中，其中制备多肽包括：

(i)提供编码多肽的核酸，该核酸包含编码包含BCN基团的氨基酸的正交密码子；和

(ⅱ)在识别所述正交密码子的正交tRNA合成酶/tRNA对存在的情况下翻译所述核酸，并将所述包含BCN基团的氨基酸整合到多肽链上，

其中所述tRNA合成酶包括具有参考序列SEQ ID NO.1的具有突变Y271M、L274G和C313A的巴氏甲烷八叠球菌(Methanosarcina barkeri)MS吡咯赖氨酸tRNA合成酶，其中所述BCN基团处于其外型形式，且其中所述包含BCN基团的氨基酸是结构如下所示的BCN赖氨酸：

2.如权利要求1所述的方法，其中所述正交密码子包括琥珀密码子，所述tRNA包括MbtRNA_CUA，所述包含BCN基团的氨基酸包含双环[6.1.0]壬-4-炔-9-基甲醇赖氨酸和所述tRNA合成酶包含具有突变Y271M、L274G和C313A的PylRS合成酶。

3.如权利要求1或2所述的方法，其中所述包含BCN基团的氨基酸整合于对应于野生型多肽上的赖氨酸残基的位置上。

4.如权利要求1所述的方法，所述方法还包括将所述多肽与四嗪化合物接触，并孵育以允许通过反电子需求Diels-Alder环加成反应将四嗪连接到BCN基团上。

5.如权利要求4所述的方法，其中四嗪的结构选自如下所示的结构之一：

6.如权利要求5所述的方法，其中四嗪的结构选自如下所示的结构之一，并且反应的准一级速率常数为至少80M^-1s^-1：

7.如权利要求4至6任一项所述的方法，其中所述四嗪化合物是选自具有选自如下所示结构之一的结构的四嗪化合物：

8.一种由权利要求1-7任一项所述的方法获得的包含BCN基团的多肽。