[发明专利]一种A群脑膜炎球菌荚膜多糖结合物的高效制备方法

说明书

本发明公开了一种A群脑膜炎球菌荚膜多糖结合物的高效制备方法，包括材料和制备工艺。本发明采用A群脑膜炎球菌荚膜多糖衍生物和白喉CRM197蛋白为原料，采用碳二亚胺EDAC作为交联剂进行偶联，通过衍生物溶液预备、混合配比、结合反应、时效处理、超滤、纯化和除菌的工艺进行制备的技术方案，克服了现有技术存在效益低的问题与不足，通过提高多糖收率和蛋白收率，使A群脑膜炎球菌荚膜多糖结合物的制备，达到了提高效益的目的。

技术领域

本发明涉及一种疫苗结合物的制备方法，具体是指用于制作A群脑膜炎球菌结合疫苗的结合物的一种A群脑膜炎球菌荚膜多糖结合物的高效制备方法。

背景技术

名词定义

脑膜炎球菌：脑膜炎球菌(meningococcus)的学名是脑膜炎奈瑟氏球菌(n.meninyitidis)，为流行性脑脊髓膜炎(流脑)的病原菌。现引起人体病变的菌株分型主要有A群、B群、C群、Y群及W135群。

脑膜炎球菌多糖疫苗：提取特定菌株脑膜炎球菌的细菌外荚膜多糖，经制剂成疫苗，用于预防该菌株脑膜炎球菌的侵袭感染。

脑膜炎球菌结合疫苗：提取特定菌株脑膜炎球菌的细菌外荚膜多糖，将荚膜多糖与特定的蛋白或多肽进行偶联，制成结合物，再制剂成疫苗，用于预防该菌株脑膜炎球菌的侵袭感染。

荚膜多糖：细菌细胞壁外荚膜中的主要成分，可以是同多糖或异多糖，简称多糖。

多糖衍生物：将荚膜多糖经过化学手段修饰，形成易于蛋白或多肽进行偶联的一种中间物；

载体蛋白：能够与荚膜多糖进行偶联的蛋白质，如破伤风类毒素(TT)，白喉类毒素(DT)，白喉减毒毒素(白喉CRM197蛋白)，B群外膜蛋白，以及其他可起到载体蛋白效应的氨基酸片段。

结合物：多糖衍生物与载体蛋白通过化学共价键进行偶联获得的一种偶联物。

多糖回收率为在结合物中，多糖的含量与在制备结合物时投入的多糖衍生物总量之比，简称多糖收率；

载体蛋白回收率为在结合物中，载体蛋白的含量与在制备结合物时投入的载体蛋白总量之比，简称蛋白收率；

所述多糖收率和蛋白收率是评估结合物制备工艺效益的重要指标，多糖收率和蛋白收率越高，则结合物制备工艺的效益越高。

现有技术采用多糖衍生物在交联剂介导下与载体蛋白进行偶联形成稳定的结合物；由于各厂家采用的多糖衍生物、载体蛋白、交联剂和制备工艺各不相同，所制备的结合物的多糖收率和蛋白收率亦不同，现有技术的多糖收率和蛋白收率分别为10％和12％左右，收率低，成本高，效益低，因此，现有技术存在多糖收率和蛋白收率低的问题与不足。

发明内容

针对上述现有技术存在的问题与不足，本发明采用A群脑膜炎球菌荚膜多糖衍生物和白喉CRM197蛋白为原料，采用碳二亚胺EDAC作为交联剂进行偶联，通过衍生物溶液预备、混合配比、结合反应、时效处理、超滤、纯化、除菌的工艺进行制备的技术方案，提供一种A群脑膜炎球菌荚膜多糖结合物的高效制备方法，旨在通过提高多糖收率和蛋白收率，使A群脑膜炎球菌荚膜多糖结合物的制备，达到提高效益的目的。

本发明的目的是这样实现的：一种A群脑膜炎球菌荚膜多糖结合物的高效制备方法，包括材料和制备工艺，其中：

所述的材料为：

衍生物，A群脑膜炎球菌荚膜多糖衍生物；

载体蛋白，白喉CRM197蛋白，简称蛋白；

交联剂，碳二亚胺EDAC；

氯化钠，分析纯；

盐酸，分析纯；

蒸馏水，分析纯；