[发明专利]稳定表达全猪源抗PEDV中和抗体PC10-IgA的CHO细胞系及其构建方法和应用

说明书

本发明公开了一株稳定表达全猪源抗猪流行性腹泻病毒(Porcine Epidemic Diarrhea Virus，PEDV)中和抗体PC10‑IgA的CHO细胞系及其构建方法和应用。所述的细胞系命名为PC10‑IgA‑CHO，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其菌种保藏编号为：CGMCC No.15293。此外，本发明还提出了一种由所述的CHO细胞系分泌产生的全猪源抗猪流行性腹泻病毒的PC10‑IgA中和抗体，该中和抗体具有中和PEDV病毒的能力，同时可以与感染Vero‑E6细胞的病毒蛋白结合，具有抗PEDV的生物学活性和功能。通过对该细胞系进行培养，可获得大量的具有抗PEDV作用的PC10‑IgA中和抗体，因此，本发明的提出使治疗性抗PEDV IgA抗体大量的获得和使用成为了可能，为PEDV的预防和治疗提供了新的技术手段。

技术领域

本发明涉及一株稳定表达抗PEDV中和抗体的CHO细胞系及其构建方法和应用，特别涉及一株稳定表达全猪源抗PEDV中和抗体PC10-IgA的CHO细胞系及其构建方法和应用。本发明属于生物医药技术领域。

背景技术

猪流行性腹泻病毒(Porcine Epidemic Diarrhea Virus，PEDV)是引起仔猪腹泻的主要病原之一，以水样腹泻、仔猪高发病率和高死亡率为主要特征，每年给我国养殖业造成重大经济损失。疫苗接种是预防PEDV腹泻发病的主要手段。但是，由于PEDV变异毒株不断出现等原因，常常导致传统的疫苗不能完全保护而免疫效果欠佳，因此，猪基因工程单克隆抗体治疗性制剂作为安全高效防控(治)产品成为家畜腹泻性疾病防治的重要补充。

PEDV经消化道感染猪，主要感染小肠上皮细胞，局部肠道黏膜免疫在抗PEDV 感染中发挥了重要作用，特别是PEDV特异性的IgA。由于PEDV主要造成新生仔猪的大量死亡，而新生仔猪免疫系统发育不完全，一旦发病，主动免疫接种来不及，开发有效的猪源IgA PEDV治疗性抗体等防治制剂对减少养猪业经济损失非常重要。

CHO细胞表达系统因其分泌内源性蛋白少，翻译后能够进行糖基化修饰和表达量高成为当今治疗性抗体主要生产系统。猪流行腹泻病毒是引起仔猪腹泻的主要病原，每年给我国养殖业造成巨大的经济损失。机体抵抗PEDV感染主要通过产生保护性抗体，特别是黏膜免疫的IgA抗体。而猪IgA的生产和纯化不容易建立。至今还没有稳定表达猪源抗PEDVIgA抗体和特异性亲和层析纯化猪IgA方法的报道。

本发明筛选获得了一株稳定表达全猪源抗PEDV中和抗体PC10-IgA的CHO细胞系，该细胞系能够持续分泌表达全猪源的PC10-IgA抗体，表达的抗体PC10-IgA 具有结合PEDV病毒蛋白和抗PEDV的中和活性，本发明的提出为进一步研发全猪源的PC10-IgA抗体制剂提供了技术手段。

发明内容

本发明的目的在于提供一株稳定表达全猪源抗PEDV中和抗体PC10-IgA的 CHO细胞系及其构建方法和应用。

为了达到上述目的，本发明采用了以下技术手段：

本发明利用前期分离到一株猪源抗PEDV的PC10单克隆抗体，通过体外构建 PC10-IgA重链和轻链表达质粒，通过共转重链和轻链至CHO细胞，利用单个细胞流式分选和G418加压筛选，获得一株稳定表达全猪源抗PEDV中和抗体PC10-IgA 的CHO细胞系。该细胞上清分泌表达的PC10-IgA抗体具有中和PEDV病毒的能力，同时可以与感染Vero-E6细胞的病毒蛋白结合，因此具有生物学活性和抗PEDV功能。

所述的一株稳定表达全猪源抗PEDV中和抗体PC10-IgA的CHO细胞系，命名为PC10-IgA-CHO，分类命名为稳定表达全猪源抗猪流行性腹泻病毒(PEDV)中和抗体PC10-IgA的CHO细胞系，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址在北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，其菌种保藏编号为：CGMCC No.15293，保藏日期为2018年1月29日。