[发明专利]一种快速鉴别毛菊苣与菊苣的方法

说明书

本发明公开了一种快速鉴别毛菊苣与菊苣的方法。该方法基于毛菊苣和菊苣单核苷酸多态性标记，毛菊苣所示序列的5’端起第466位为G，第640位为C，而此位点与菊苣所对应位点具有稳点的变异。本发明基于叶绿体rbcL基因核苷酸序列SNP位点，设计出可快速、准确鉴别毛菊苣与菊苣的特异性引物F和R，并在此基础上优化建立PCR检测体系，为两者鉴别提供了分子鉴定依据。根据该特异性引物建立的检测方法，操作简便，特异性好，灵敏度高，可实现对两者的快速、准确的鉴别，适于广泛的推广使用。

技术领域

本发明涉及毛菊苣和菊苣的分子生物学检测，特别涉及一种快速鉴别毛菊苣与菊苣的方法。

背景技术

毛菊苣Cichorium glandulosum Boiss.et Huet为维吾尔族传统习用药材，维吾尔语名称为卡斯纳Ksina，为菊科植物毛菊苣的干燥地上部分或根，该品种被收录于2015年版《中国药典》，具有清肝利胆，健胃消食，利尿消肿；用于湿热黄疸，胃痛食少，水肿尿少。在国内，主要分布于新疆南疆的阿克苏，和田、喀什等平原绿洲区域，新疆各地均有栽培。国外，高加索、土耳其均有分布。近年来发现，维吾尔药毛菊苣具有非常好的保肝、降脂、抗炎等作用。随着对毛菊苣的市场需求量不断地增加，市场中毛菊苣与菊苣Cichorium intybusL常常混淆使用，在一定程度上影响了药用的安全有效性。由于两者在其外观、形态比较相似，传统的物理化学方法很难将其快速准确的区分出来，其检测方法也受到地理环境及其人为的影响，很难对其进行质量有效的控制。因此，建立准确而可靠的鉴定方法显得尤为重要。

位点特异性PCR技术可用于检测单个或多个位点的核苷酸变异，主要是根据Newton等建立的扩增阻滞突变系统原理，由于DNA聚合酶缺乏3’-5’外切酶活性，从而不能与模板DNA进行正确的互补配对，因此就不能有效扩增目的基因。本发明即是基于此原理，而建立一种快速鉴别毛菊苣与菊苣的方法及其应用，以期建立准确可靠的DNA分子检测方法，为将来两者质量控制提供坚实的科研基础。

发明内容

本发明的目的是基于rbcL叶绿体核苷酸序列SNP位点提供一种可快速、准确地鉴别毛菊苣和菊苣的特异性引物及鉴别方法及其应用。

一种毛菊苣和菊苣单核苷酸多态性标记，其核苷酸序列如序列表SEQ IDNO：1所示，其中，毛菊苣所示序列的5’端起第466位为G，第640位为C，而此位点与菊苣所对应位点具有稳点的变异。

所述引物的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3所示。

一种快速鉴别毛菊苣与菊苣的方法，按照如下步骤进行：

(1)提取待检样品中的DNA；

(2)以步骤(1)中所提取的DNA为模板，使用如序列表SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3所示的引物序列，进行位点特异性PCR扩增；

(3)对上述PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳，根据电泳检测结果来鉴别出毛菊苣及菊苣。

所述PCR扩增反应结束后，如果经琼脂糖凝胶电泳检测发现扩增出目的条带，则鉴定为毛菊苣，反之则鉴定为菊苣。

所述毛菊苣与菊苣鉴别的部位为其基原植物、果实、根皮或茎。

与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：本发明是基于叶绿体rbcL基因核苷酸序列SNP位点，设计出可快速、准确鉴别毛菊苣与菊苣的特异性引物F和R，并在此基础上优化建立PCR检测体系，为两者鉴别提供了分子鉴定依据。根据该特异性引物建立的检测方法，操作简便，特异性好，灵敏度高，可实现对两者的快速、准确的鉴别，适于广泛的推广使用。

附图说明