[发明专利]发酵虫草菌粉及制剂甾醇类HPLC指纹图谱的构建方法及其指纹图谱

权利要求书

1.一种发酵虫草菌粉甾醇的指纹图谱的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)对照品溶液的制备；

(2)供试品溶液的制备；

(3)HPLC测定指纹图谱及相似度评价；分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液，HPLC分离检测，流动相为甲醇-水洗脱系统，得到发酵虫草菌粉甾醇指纹图谱，将得到的指纹图谱导入相似度软件评价系统进行相似度评价；

其中，步骤(1)对照品溶液的制备：分别精密称取麦角甾醇、豆甾醇、β-谷甾醇和胡萝卜苷适量，置于同一容量瓶中，加入甲醇超声溶解，即得对照品溶液；其中，对照品溶液浓度为：麦角甾醇122μg/mL、豆甾醇119μg/mL、β-谷甾醇114μg/mL、胡萝卜苷113μg/mL；

其中，步骤(2)所述的供试品的制备：称取发酵虫草菌粉1.5g，加入甲醇10ml超声提取60min，取出冷却至常温后，8000r/min离心10min，取上清液过0.22μm微孔滤膜，过滤液用甲醇定容至10ml，取定容后的提取液0.9ml，加入浓度为0.4mol/L的氢氧化钾-甲醇溶液混合均匀进行皂化反应，水浴皂化反应45min后取出放冷，过微孔滤膜后即得供试品溶液；

其中，步骤(3)所述的HPLC条件为：DikMA Platisil ODS C₁₈色谱柱，规格为250mm×4.6mm,5μm，流动相使用甲醇-水系统，检测波长208nm，柱温：30℃，进样量20μl，梯度洗脱如下所示：

2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，发酵虫草菌粉甾醇类指纹图谱中，图谱总长度为46min，确定了12个共有特征峰，鉴定了4个特征峰，分别为7号峰为胡萝卜苷；10号峰为麦角甾醇；11号峰为豆甾醇；12号峰为β-谷甾醇，

以10号峰麦角甾醇峰为参照，其他色谱峰相对保留时间和相对峰面积如下：

1号峰，平均相对保留时间为0.3600，平均相对峰面积为2.8712；

2号峰，平均相对保留时间为0.4357，平均相对峰面积为7.3177；

3号峰，平均相对保留时间为0.4686，平均相对峰面积为0.1348；

4号峰，平均相对保留时间为0.5343，平均相对峰面积为0.0686；

5号峰，平均相对保留时间为0.5583，平均相对峰面积为0.568；

6号峰，平均相对保留时间为0.6794，平均相对峰面积为0.5721；

7号峰，平均相对保留时间为0.7336，平均相对峰面积为0.0902；

8号峰，平均相对保留时间为0.7709，平均相对峰面积为0.1264；

9号峰，平均相对保留时间为0.8887，平均相对峰面积为0.0959；

10号峰，平均相对保留时间为1，平均相对峰面积为1；

11号峰，平均相对保留时间为1.2698，平均相对峰面积为0.0558；

12号峰，平均相对保留时间为1.3857，平均相对峰面积为0.0458。