[发明专利]一种鉴定条纹隔贻贝的方法

说明书

本发明提供一种鉴定条纹隔贻贝的方法，是对待检测的贻贝属个体用引物对进行PCR扩增，然后对扩增产物进行基因分型，其中条纹隔贻贝对应的核苷酸片段的序列为SEQ ID NO:1。本发明筛选获得了能够鉴别条纹隔贻贝的SNP位点，通过检测该SNP位点，利用高分辨率熔解曲线方法可以对条纹隔贻贝进行基因分型。本发明从分子水平对条纹隔贻贝品种进行鉴定，摆脱了靠表型进行鉴别的局限性。

技术领域

本发明属于贝类分子标记辅助育种技术领域，具体涉及一种鉴定条纹隔贻贝的方法。

背景技术

贻贝在分类上属于软体动物门(Mollusca)、瓣鳃纲(Lamellibranchia)、异柱目(Anisomyaria)、贻贝科(Mytilidae)海洋生物。我国已发现的有近50种，分18个属。它们的贝壳都呈三角形，表面有一层黑漆色发亮的外皮。两个外套膜除了在背面连接以外，在后端也有愈合形成排水孔，外套膜的后腹面的边缘有很多分枝状的小触手。有两个闭壳肌，前面一个较小，后面一个较大，利用闭壳肌和韧带开启关闭壳，两瓣壳之间常有缝隙，足分泌的足丝即从缝隙中伸出来固定在岩石或其他物体上。贻贝的摄食也跟其他双壳类软体动物一样，只能被动地从通过它身体内部的水流中获得。

条纹隔贻贝(Septifervirgatus)为暖水性广分布种。但仅见于西太平洋区，日本自北海道至琉球群岛，向南至东海和南海有分布。为潮间带中、下区的常见种，但多密集在低潮线至潮线下8米左右的水区。其贝壳呈楔形，中等大小，一般壳长45.5毫米，高26毫米，宽21毫米。壳顶较尖，位于前端。壳面隆肋有的高有的低，整个壳面被有细放射肋；肋分叉，较低，有的个体常不明显，肋间距离较宽。壳表呈紫褐色，顶部常呈淡紫和淡粉色，贝壳内面灰蓝色，有时带浅红色；肌痕明显，壳周缘具有细缺刻，壳顶下方有三角形小隔板。铰合部窄，仅有1－3个粒状小突起。外套薄，外套缘有褶或触手。前闭壳肌小，位于隔板上；后闭壳肌大，呈弯月形。足丝孔略显；足丝较发达。

目前对贻贝属分类常采用贝壳形状、铰合齿等外部形态特征，但是贻贝品种间在浮游期、稚贝期外形相似，且自然杂交个体、脱壳贩卖个体、表型受环境塑造后的个体，单凭外形较难区分。而且，随着分子标记辅助遗传育种在水产领域中的广泛应用，也需要开发一套高效实用的贻贝品种鉴定方法，为贻贝的生产育苗、科学研究和市场整顿提供有力的依据。

发明内容

本发明的目的是提供一种鉴定条纹隔贻贝的方法，可以有效的将条纹隔贻贝(Septifervirgatus)与目前主要养殖的紫贻贝(Mytilus edulis)、翡翠贻贝(Pernaviridis)和厚壳贻贝(Mytiluscoruscus)区分开，从而有效的进行条纹隔贻贝的杂交和品系提纯的研究。

本发明一种鉴定条纹隔贻贝的方法，是对待检测的贻贝属个体用引物对进行PCR扩增，然后对扩增产物进行基因分型，其中条纹隔贻贝对应的核苷酸片段的序列为SEQ IDNO:1；

TACTCTAGGGATAACAGCGCAATCTTTTAGGATAGTTGAAATTGGTTAAATGGTTTGCGACCTCGATGTTGGCTTT

其中所述的基因分型，是采用高分辨率熔解曲线的方法，或是测序进行基因分型；

上述的方法，其中引物对的上游引物的序列如下：

5′-TACTCTAGGGATAACAGCGCAAT-3′(SEQ ID NO:2)

下游引物的序列如下：

5′-AAAGCCAACATCGAGGTCGC-3′(SEQ ID NO:3)。

本发明筛选获得了能够鉴别条纹隔贻贝的SNP位点，通过检测该SNP位点，利用高分辨率熔解曲线(HRM)方法可以对条纹隔贻贝进行基因分型。本发明从分子水平对条纹隔贻贝品种进行鉴定，摆脱了靠表型进行鉴别的局限性。

附图说明