[发明专利]一种用于检测多硫化氢的荧光探针及其制备方法与专用检测试剂盒

说明书

本发明提出了一种用于检测多硫化氢的荧光探针及其制备方法与专用检测试剂盒，一种用于检测多硫化氢的荧光探针，该荧光探针为2‑丁基‑6‑硝基‑1H‑苯并[de]异喹啉‑1,3(2H)‑二酮，本发明基于多硫化氢可与硝基发生还原反应，将4‑硝基作为特异性响应基团，采用1,8‑萘酰亚胺荧光团，萘酰亚胺荧光团自身具有良好的荧光性质，设计了一种萘酰亚胺类荧光探针，本设计的试剂盒与多硫化氢反应后则可显示微黄色并且发出强烈的荧光，灵敏度高，多硫化氢浓度在≥10μM时即可观察到颜色的变化，该显色反应仅在多硫化氢存在的条件下发生，其他常见的无机盐、活性氮、活性氧、氨基酸、维生素、生物巯基物种不产生干扰。

技术领域

本发明涉及化学分析、生物分析技术领域，特别是指一种用于检测多硫化氢的荧光探针及其制备方法与专用检测试剂盒。

背景技术

活性硫物种(Reactive sulfur species,RSS)是生物体内一类含硫生物分子的总称，是生物体内内源性活性物种之一。例如，硫烷硫，硫化氢，谷胱甘肽，多硫化氢等。其中，多硫化氢作为硫化氢的直接氧化形式，具有抗氧化性，细胞保护性以及氧化还原性。多硫化氢通过细胞内一系列的氧化还原信号来调节细胞功能。据报道，由硫化氢参与的一些生理活动，实际上是由多硫化氢介导。因此，为了获得多硫化氢更多的化学性质和生物性质，对其在生物系统中的检测是必不可少的。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于检测多硫化氢的荧光探针及其制备方法与专用检测试剂盒。

本发明的技术方案是这样实现的：一种用于检测多硫化氢的荧光探针，该荧光探针为2-丁基-6-硝基-1H-苯并[de]异喹啉-1,3(2H)-二酮，其结构式如式Ⅰ所示：

本发明提出一种用于检测多硫化氢的荧光探针的制备方法，包括以下步骤：

在催化剂存在的条件下，于30℃～90℃，将式Ⅱ所述的4-硝基-1,8-萘二甲酸酐与正丁胺混匀进行还原反应，反应1～24小时，得到式Ⅰ所示化合物，

优选的，所述催化剂为有机碱和无机碱中的至少一种；所述有机碱为三乙胺和吡啶中的至少一种；所述无机碱为碳酸钾、氢氧化钠、碳酸钠和碳酸氢钠中的至少一种。

优选的，所述4-硝基-1,8-萘二甲酸酐、正丁胺和催化剂的投料摩尔比为1：0.5～5：0.5～5。

优选的，所述4-硝基-1,8-萘二甲酸酐、正丁胺和催化剂的投料摩尔比为1:1～4:1～4。

进一步优选，所述4-硝基-1,8-萘二甲酸酐、正丁胺和催化剂的投料摩尔比为1:1:1或1:4:4。

优选的，所述还原反应在有机溶剂中进行，所述有机溶剂为N,N-二甲基甲酰胺、三乙胺、乙醇和乙腈中的至少一种。

本发明还提出一种专用检测试剂盒，包含权利要求1中式Ⅰ所示化合物和溶剂，

式Ⅰ所示化合物的浓度为1mM，

溶剂为乙醇或二甲基亚砜。

优选的，还包括含催化剂的缓冲液，

所述缓冲液为pH值为6.5～8.5的磷酸盐缓冲液，所述磷酸盐选自Na₂HPO₄、NaH₂PO₄和KH₂PO₄中的至少一种；所述磷酸盐的浓度为0.01～0.5M；所述催化剂为溴化十六烷三甲基铵，其浓度为0.01～0.1mM。

本发明提供的多硫化氢检测试剂盒在测定多硫化氢含量中的应用，尤其是在检测在生物系统中细胞内产生多硫化氢含量中的应用，均属于本发明的保护范围。