[发明专利]一种应用于鹅亲子鉴定的方法

说明书

本发明涉及的是一种应用于鹅亲子鉴定的方法，该方法联合使用20个多态信息含量较高且等位基因数为5个以上的微卫星标记，鉴定材料为基因组DNA。鉴定方法简要如下：使用PCR技术对20个微卫星标记进行扩增；采用Sanger测序方法对PCR扩增产物进行基因型判定；使用排除法，当累积非父排除概率大于99％或存在2个及以上基因型不遵循孟德尔遗传规律时，即可排除子代与假设亲本间的亲子关系；若使用排除法后子代存在2个及以上的候选亲本，则分别计算各个候选亲本似然函数比值的自然对数值(LOD)，通过比较LOD值的大小来认定候选亲本是后代真实亲本的可能性。本发明可解决鹅大群繁殖过程中后代个体识别困难、系谱信息混乱甚至发生错误等问题。

技术领域

本发明涉及的是动物遗传育种技术领域，具体涉及的是一种鹅亲子鉴定的方法。

背景技术

早期的亲子鉴定将血型、血清型以及酶型等作为遗传标记。当前，DNA分子标记己经取代了传统的遗传标记，成为亲子鉴定使用的主要标记。有性生殖将双亲的DNA随机地结合在一起，将个体的DNA序列与另一个个体的DNA序列进行比较，可以表明其是否具有亲子关系。微卫星标记是常用的DNA分子标记，其多态性丰富，序列两端是相对保守的单拷贝序列，等位基因数目高度可变，杂合度高，遗传稳定性较好，突变率低，呈共显性遗传，因此被广泛应用于构建基因图谱、监测遗传操作效应、品种或品系遗传纯度的测定及遗传关系确定、个体及群体亲缘关系的鉴定当中。

鹅一般在水中或陆地成群饲养，自然交配，在繁殖阶段母鹅可与不同的公鹅交配，往往多个母鹅所产种蛋集中在一个或几个窝内。无法查证产生种蛋的父本和母本，造成后代个体识别困难，系谱信息混乱甚至发生错误，进而无法有效评价种鹅的育种价值，阻碍鹅育种工作的顺利进行。

发明内容

本发明的目的是针对上述问题提供一种应用于鹅亲子鉴定的方法，用于解决鹅育种过程中，因大群交配、不同亲本种蛋混合而导致的个体识别困难、系谱不清等难题。

本发明通过以下技术方案来实现：获取鹅基因组DNA(来源可以为血液基因组DNA及其他组织细胞DNA)；以基因组DNA为模板，根据设计的20对微卫星标记引物的不同反应程序分别进行PCR扩增；采用Sanger测序法对PCR扩增产物进行基因型判定；根据基因型判定结果联合使用排除法与似然法进行亲子关系鉴定。

具体实施方式

为了更清楚的说明本发明的技术方案，下面结合试验，进一步阐述本发明的内容。具体试验方法及试验结果如下：

一、用于鹅亲子鉴定的微卫星标记的筛选

1、微卫星标记引物序列信息

表1微卫星标记扩增序列信息

2、血液采集

试验1鹅群大小为400只，分别进行翅下静脉采血1mL，使用柠檬酸钠作为抗凝剂抗凝，于1.5mL Ep管中，冷藏带回实验室，-80℃保存，待提取DNA。

3、基因组DNA提取

按照TIANamp Blood DNA Kit说明书操作步骤进行血液基因组DNA的提取，并进行DNA质量及纯度检测。

4、PCR反应

采用25μl反应体系，具体见表2，反应程序见表3。PCR反应结束后进行PCR反应产物检测。

表2PCR扩增体系

表3PCR反应程序