[发明专利]一种具有降糖活性的苦瓜皂苷和多糖双水相一步提取方法

说明书

本发明涉及一种具有降糖活性的苦瓜皂苷和多糖双水相一步提取方法，包括：将干燥苦瓜粉与异丙醇/(NH₄)₂SO₄双水相体系混匀，采用超声‑微波协同萃取进行提取后，分离上下相。上相为苦瓜皂苷粗提液，经旋转蒸发至无醇味，制得苦瓜皂苷提取液，用AB‑8型大孔树脂静态吸附纯化得苦瓜皂苷精提液，冷冻干燥制得苦瓜皂苷成品。下相为苦瓜多糖粗提液，经无水乙醇沉淀、丙酮洗涤、透析，得苦瓜多糖精提液，冷冻干燥制得苦瓜多糖成品。本发明采用超声‑微波辅助双水相体系的提取方法，一步制备苦瓜皂苷和苦瓜多糖粗提液，提取工艺简单、成本低，可有效缩短提取时间、提高萃取纯度和减少提取步骤，对α‑葡萄糖苷酶和α‑淀粉酶有较强抑制作用。

技术领域

本发明涉及天然产物深加工技术领域，具体涉及一种苦瓜皂苷和苦瓜多糖双水相一步提取法及体外降糖活性考察。

背景技术

苦瓜，又名凉瓜，是葫芦科苦瓜属的一种攀缘植物，广泛种植于热带和亚热带地区，是人们生活中的一种常见蔬菜，在医药上有明目、助消化、清凉解毒、利尿和治疗糖尿病等功效，因此素有“药用蔬菜”之称。现代研究表明苦瓜中皂苷和多糖是其发挥降糖作用的主要活性成分，因此，建立苦瓜中皂苷和多糖的提取工艺技术，对指导苦瓜的精深加工及其功能食品研制具有重要意义。目前，对苦瓜皂苷和苦瓜多糖的提取工艺多是分别单独提取，尚未见苦瓜皂苷和多糖的同时提取工艺报道，且其通常采用普通有机溶剂热水浴或热醇浴提取、超声波或微波提取、大孔吸附树脂提取、酶提取等方法，多为单独或两两结合使用这些方法进行提取，但其仍存在能耗高、提取时间长、提取纯度低、操作繁琐、有机溶剂残留等问题。目前，尚未见采用超声-微波辅助双水相体系一步萃取工艺报道。此外，对苦瓜降血糖作用研究前人报道较多，但多为通过造大小鼠的Ⅰ/Ⅱ型糖尿病动物模型对苦瓜皂苷和多糖的体内降糖作用及机理进行研究，而苦瓜皂苷和多糖对α-葡萄糖苷酶活性抑制作用的体外降糖研究较少，尤其是对苦瓜皂苷和多糖抑制α-葡萄糖糖苷酶的活性比较研究较少。此外，苦瓜皂苷和多糖抑制α-淀粉酶的活性研究尚未见报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种能够同时萃取得到苦瓜皂苷和苦瓜多糖的新型提取方法，该方法采用超声-微波辅助双水相体系分离技术，充分利用超声振动的空化作用、微波的高能作用以及双水相的快速分离作用，尤其是双水相体系可提供一个温和的分离环境和富集效果，有利于获得高纯度的苦瓜皂苷和苦瓜多糖。

本发明的苦瓜皂苷和苦瓜多糖双水相一步提取方法包括如下步骤：

（1）制备苦瓜皂苷和苦瓜多糖粗提液：取干燥的苦瓜粉于异丙醇/(NH₄)₂SO₄双水相体系中，震荡混匀，使用超声-微波协同萃取/反应仪进行提取；待提取结束后，离心分离上下相，得到富集皂苷的上相，即苦瓜皂苷粗提液；富集多糖的下相，即苦瓜多糖粗提液；

（2）制备苦瓜皂苷提取液：将苦瓜皂苷粗提液经旋转蒸发至无醇味，制得苦瓜皂苷提取液；

（3）制备苦瓜皂苷精提液：将苦瓜皂苷提取液进一步通过AB-8型大孔树脂静态吸附纯化，制得苦瓜皂苷精提液；

（4）制备苦瓜多糖精提液：将苦瓜多糖粗提液经无水乙醇醇沉、丙酮洗涤、透析除盐，制得苦瓜多糖精提液；

（5）冷冻干燥制备苦瓜皂苷和苦瓜多糖成品。

其中，步骤(1)中异丙醇/(NH₄)₂SO₄双水相萃取条件为系线长度(TLL)为65，上相与下相体积比(相比R)为1，其中各组分质量分数分别为15.33%(NH₄)₂SO₄、31.61%异丙醇，其余用0.01mol/L PBS缓冲液(pH=7.0)补齐；

超声-微波协同萃取/反应仪为CW-2000型，超声波功率50W，微波功率800W；