[发明专利]一种与辣椒成熟果颜色基因相关的插入/缺失位点、分子标记、分子标记引物和应用在审
申请号: | 201810243771.1 | 申请日: | 2018-03-23 |
公开(公告)号: | CN108384875A | 公开(公告)日: | 2018-08-10 |
发明(设计)人: | 欧立军;刘宇华;邹学校;吕俊恒;马艳青;张竹青;陈文超;戴雄泽 | 申请(专利权)人: | 湖南省蔬菜研究所 |
主分类号: | C12Q1/6895 | 分类号: | C12Q1/6895;C12N15/11 |
代理公司: | 湖南天地人律师事务所 43221 | 代理人: | 陈旭云 |
地址: | 421001 湖*** | 国省代码: | 湖南;43 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 果实颜色 辣椒果实 分子标记引物 辣椒 分子标记 颜色基因 位点 成熟 分子生物学领域 分子机理 辣椒育种 图位克隆 位点设计 自然群体 种鉴定 扩增 解析 育种 筛选 基因 应用 研究 | ||
1.一种与辣椒成熟果果实颜色紧密相关的插入/缺失位点,其特征在于所述的插入/缺失位点为从辣椒LOC107875664基因编码区(ATG开始)上游3277bp开始至编码区一段4513bp插入/缺失。
2.一种与辣椒成熟果果实颜色紧密相关的分子标记扩增引物,其特征在于所述分子标记扩增引物是针对权利要求1所述的与辣椒成熟果果实颜色紧密相关的插入/缺失位点设计的引物。
3.根据权利要求2所述的与辣椒成熟果果实颜色紧密相关分子标记扩增引物,其特征在于,所述的分子标记扩增引物为以辣椒LOC107875664基因缺失上游部分序列(包含部分缺失序列)和缺失下游部分序列(包含部分缺失序列)设计的检测该缺失位点的两对引物。
4.根据权利要求3所述的与辣椒成熟果果实颜色紧密相关的分子标记扩增引物,所述的分子标记扩增引物序列为:缺失上游HS5标记:HS5-F(SEQ ID NO.1):GCAAGTATAGCTAATACCAACATTAC,HS5-R(SEQ ID NO.2):AGTTCCTCAAGTGGTTAGCC。缺失下游HS6标记HS6-F(SEQ ID NO.3):GTGAGTCGGCCTATGTTATCG,HS6-R(SEQ ID NO.4):GTTTGAACAACGATGACAATGTG。
5.一种与辣椒果实颜色基因连锁的分子标记HS5,HS6,其特征在于,利用权利要求4所述的分子标记扩增引物,HS5扩增出的PCR产物片段大小为500bp,核苷酸序列如SEQ IDNO.5所示,分子标记HS6扩增出的PCR产物片段大小为714bp,核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示。
6.如权利要求1所述的与辣椒成熟果果实颜色紧密相关插入/缺失位点在鉴定或辅助筛选辣椒果实的颜色或辣椒果实育种中的应用。
7.如权利要求2-4任一所述的与辣椒成熟果果实颜色紧密相关的分子标记扩增引物在鉴定或辅助筛选辣椒果实的颜色或辣椒果实育种中的应用。
8.如权利要求5所述的与辣椒果实颜色基因连锁的分子标记HS5,HS6在鉴定或辅助筛选辣椒果实的颜色或辣椒果实育种中的应用。
9.一种鉴定和筛选辣椒果实颜色的方法,具体步骤如下:
(1)以待测样品基因组DNA为模板,利用权利要求5所述的分子标记HS5,HS6扩增引物进行PCR扩增,获得扩增产物;
(2)将扩增产物经过琼脂糖凝胶电泳分离;
(3)结果分析,若琼脂糖凝胶上出现500bp(SEQ ID NO.5)和714bp(SEQ ID NO.6)两条特异性条带,则判定为成熟果果实颜色为红色的材料,若仅出现一条602bp(SEQ ID NO.7)带,则判定为成熟果果实颜色为黄色的材料。
10.如权利要求9所述的鉴定和筛选辣椒果实颜色的方法,其特征在于所述鉴定和筛选辣椒果实颜色的方法步骤(1)中,PCR扩增程序为95.0℃预变性3min;95.0℃变性30s,55.0℃复性30s,72.0℃延伸45s,32个循环;72.0℃延伸5min,8℃保存。
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