[发明专利]一种磷酸肌酸钠的纯化方法

权利要求书

1.一种磷酸肌酸钠的纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)向酶法制备磷酸肌酸钠反应液中添加氢氧化钠，将反应液的pH值调节至9-11.5，静止放置1-6小时，弃沉淀留上清液，待用；

2)将上清液通过含氨基膦酸基团的阳离子交换树脂，上样流速2-6BV/h，收集穿液；

3)将穿液通过含伯胺基、仲胺基或叔胺基基团的弱阴离子交换树脂，上样流速2-6BV/h，收集穿液；

4)将穿液通过含季胺基基团的强阴离子交换树脂吸附，上样流速1-3BV/h，洗脱磷酸肌酸钠；

5)将磷酸肌酸钠洗脱液通过纳滤浓缩和/或减压浓缩的方式进行浓缩；

6)使用乙醇沉淀磷酸肌酸钠；

7)30-50℃干燥，得成品。

2.根据权利要求1所述的一种磷酸肌酸钠的纯化方法，其特征在于，所述步骤1)还包括处理上清液：

11)将步骤1)的上清液通过离心和/或过滤的方式去除上清液中的不溶物沉淀；

12)将步骤11)去除沉淀后的上清液进行超滤，去除大分子物质。

3.根据权利要求1所述的一种磷酸肌酸钠的纯化方法，其特征在于，所述方法还包括：使用活性炭去除内毒素，所述活性炭使用浓度为0.01-0.5％。

4.根据权利要求1所述的一种磷酸肌酸钠的纯化方法，其特征在于，所述步骤1)的反应液为酶法制备磷酸肌酸钠反应结束后的料液，所述反应液中包含：磷酸肌酸钠、肌酸、ATP、ADP及AMP的一种或几种组合、镁离子、和/或锰离子，以及肌酸激酶。

5.根据权利要求4所述的一种磷酸肌酸钠的纯化方法，其特征在于，所述反应液中还包括锌离子、钾离子、钙离子、铵离子、氯离子、磷酸根、硫酸根及醋酸根中的一种或多种组合，和/或ATP再生酶。

6.根据权利要求2所述的一种磷酸肌酸钠的纯化方法，其特征在于，所述步骤12)中超滤膜截留分子量5-100kDa。

7.根据权利要求1所述的一种磷酸肌酸钠的纯化方法，其特征在于，

步骤2)中使用的阳离子交换树脂为LX-160、D860或LSC-500；

步骤3)中使用的弱阴离子交换树脂为D315、D351或D354；

步骤4)中使用的强阴离子交换树脂为711、717、D201、D202、D293、D296、LX-67或LX-958。

8.根据权利要求1所述的一种磷酸肌酸钠的纯化方法，其特征在于，所述步骤4)的洗脱过程包括：

41)纯水洗脱，洗脱流速1-6BV/h；

42)20-80mM NaCl洗脱，除掉肌酸等杂质，洗脱流速1-6BV/h；

43)100-300mM NaCl洗脱磷酸肌酸钠，洗脱流速1-6BV/h，收集此步穿液。

9.根据权利要求1所述的一种磷酸肌酸钠的纯化方法，其特征在于，所述步骤5)中纳滤膜的截留分子量为200-300，磷酸肌酸钠浓缩后的浓度为200-500mM。

10.根据权利要求1所述的一种磷酸肌酸钠的纯化方法，其特征在于，所述6)中乙醇的浓度为70-90％，温度范围-15℃-15℃。