[发明专利]蛭石固定化耐低温降解多环芳烃混合菌颗粒及其制备方法和应用

权利要求书

1.蛭石固定化耐低温降解多环芳烃混合菌颗粒在降解冻融土壤中多环芳烃污染物中的应用，其特征在于，方法如下：于含有多环芳烃污染物的冻融土壤中，加入蛭石固定化耐低温降解多环芳烃混合菌颗粒，补加或不补加水，使土壤含水量为20～30%；

所述蛭石固定化耐低温降解多环芳烃混合菌颗粒，是以酸处理的蛭石为载体，采用吸附法固定混合菌剂；所述的混合菌剂由保藏编号为CGMCC NO.14048的假单胞菌(Pseudomonas sp.) SDR4和保藏编号为CGMCC NO. 15183的高山被孢霉(Mortierella alpine ) JDR7，按体积比1:1混合组成；所述的多环芳烃是菲、芘和苯并[a]芘。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述蛭石固定化耐低温降解多环芳烃混合菌颗粒的制备方法，包括如下步骤：

1）混合菌剂的制备：将保藏编号为CGMCC NO.14048的假单胞菌(Pseudomonas sp.)SDR4和保藏编号为CGMCC NO. 15183的高山被孢霉(Mortierella alpine ) JDR7，按体积比1:1，接种于完全培养基中，15℃，120r/min摇床混合培养3d，制得混合菌剂；

2）载体预处理：按固液比1∶20，将蛭石和HCl混合均匀，80-85 ℃恒温水浴搅动2 h，蒸馏水冲洗，烘干，再于马弗炉500 ℃焙烧6 h，得酸处理的蛭石；

3）载体固定化：将酸处理的蛭石121℃高温灭菌60 min，按1.0 ml/g 的固液比，用增殖培养液浸润酸处理的蛭石，培养12～24h后；按10%接种量加入步骤1）制备的混合菌剂，15℃恒温培养，每24 h补加一次增殖培养液，连续补加3 次后，再继续15℃恒温培养4～5d，得蛭石固定化耐低温降解多环芳烃混合菌颗粒。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的完全培养基是牛肉膏5 g，蛋白胨10g，葡萄糖10g，酵母粉5g，NaCl 5 g，琼脂20 g，蒸馏水1000 mL，pH 为7.1～7.2，121 ℃ 灭菌20 min。

4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的增殖培养液是蔗糖4 g，酵母膏3 g，KH₂PO₄ 0.5 g，(NH₄)₂HPO₄ 2 g，MgSO₄·H₂O 0.25 g，pH 6.0～6.5，121 ℃ 灭菌20 min。