[发明专利]pH响应性蛋白高分子两亲体的制备及其应用

权利要求书

1.一种制备蛋白质-高分子两亲体的方法，其特征在于，包括：

在Tris-HCl缓冲液中，

(1)将引发剂与蛋白质进行共价连接，以便获得蛋白质-引发剂结合体，所述蛋白质为人血清白蛋白；

(2)将所述蛋白质-引发剂结合体与单体化合物进行原位聚合，所述单体化合物为2-(二异丙基氨基)甲基丙烯酸乙酯，以便获得蛋白质-高分子两亲体，所述高分子在pH5～10范围内具有pH响应性，所述高分子pKa在5-10；

所述原位聚合是在低氧或者惰性气体氛围下、温度为0-80℃、磁力搅拌的条件下进行5分钟～24小时；

所述原位聚合是在CuCl以及1,1,4,7,10,10-六甲基三乙烯四胺的催化下进行的；

所述蛋白质-引发剂结合体、所述单体化合物、所述CuCl、所述1,1,4,7,10,10-六甲基三乙烯四胺的摩尔比为1:(200-3000):(10-500):(10-4000)；

其中，所述引发剂为原子转移自由基聚合反应的引发剂。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述原子转移自由基聚合的引发剂选自多卤化物、卤代酯类、卤代酮类以及卤代腈类的至少之一。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述蛋白质与所述引发剂通过共价键连接，所述共价键连接的位点在所述蛋白质的N-或C-端及其它不干扰所述蛋白质的活性的位点。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述连接位点为人血清白蛋白上的34位半胱氨酸。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述引发剂为式(I)所示化合物，

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，将预先溶于缓冲溶液中的所述蛋白质与所述引发剂在室温条件下进行连接处理5分钟-24小时。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述蛋白质与所述引发剂的偶联比是1:1。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述蛋白质-引发剂结合体、所述单体化合物、所述CuCl、所述1,1,4,7,10,10-六甲基三乙烯四胺的摩尔比为1:500:40:100。

9.一种蛋白质-高分子两亲体，其特征在于，所述蛋白质-高分子两亲体是根据权利要求1～8任一项所述的方法获得的。

10.一种纳米颗粒，其特征在于，由权利要求9所述的蛋白质-高分子两亲体自组装形成，包括：

疏水核心，所述疏水核心由所述蛋白质-高分子两亲体的疏水区构成；以及

亲水外壳，所述亲水外壳设置在所述疏水核心的外表面，由所述蛋白质-高分子两亲体的亲水区构成。

11.根据权利要求10所述的纳米颗粒，其特征在于，进一步包括装载化合物。

12.根据权利要求11所述的纳米颗粒，其特征在于，所述化合物包括疏水性小分子药物和荧光分子。

13.根据权利要求12所述的纳米颗粒，其特征在于，所述小分子药物选自吉西他滨、紫杉醇、阿霉素、吉非替尼、甲氨蝶呤中的至少之一。

14.根据权利要求12所述的纳米颗粒，其特征在于，所述荧光分子选自磺酰罗丹明B、吲哚菁绿、异硫氰酸荧光素、溴化乙锭、水溶性荧光蓝、茶酐类水溶性荧光染料、水溶性菁染料琥珀酰亚胺酯类染料、藻红蛋白香豆素、细胞膜红色荧光探针、罗丹明200以及荧光素酯中的至少之一。

15.根据权利要求11所述的纳米颗粒，其特征在于，所述化合物为吲哚菁绿。