[发明专利]一种地黄提取物、制备方法及在促进CIK细胞体外增殖方面的应用

说明书

本发明公开了一种地黄提取物、制备方法及在促进CIK细胞体外增殖方面的应用。该提取物中地黄素B、地黄素D和焦地黄素A总含量不低于90％，制备方法包括：步骤S1，将鲜地黄片用乙醇水溶液热回流提取，减压浓缩得浸膏；步骤S2，将浸膏用水溶解，先用石油醚萃取除杂，再用二氯甲烷萃取，合并二氯甲烷萃取液，浓缩干燥得二氯甲烷萃取物；步骤S3，将二氯甲烷萃取物上样于XDA‑1B大孔吸附树脂柱，先用30％乙醇洗脱除杂，再用75％乙醇洗脱，收集8‑10BV洗脱液，浓缩干燥得地黄提取物粗品；步骤S4，将地黄提取物粗品上样于正相硅胶柱，用体积比为10:1:0.2的二氯甲烷/甲醇/异丙醇混合溶剂洗脱，收集6‑7BV洗脱液，浓缩干燥。该提取物可以促进CIK细胞体外增殖。

技术领域

本发明属于医药领域，具体涉及一种地黄提取物、制备方法及在促进CIK细胞体外增殖方面的应用。

背景技术

地黄素B、地黄素D、焦地黄素A和焦地黄素B为从地黄中分离得到的天然产物，化学结构非常相似，化学信息如下表所示。

目前尚未见上述四种地黄素及以该四种地黄素为主要成分的提取物在CIK细胞体外增殖方面的研究报道。

发明内容

本发明目的在于提供一种地黄提取物、制备方法及在促进CIK细胞体外增殖方面的应用。

上述目的通过如下技术方案实现：

一种地黄提取物，以地黄块根为原料制备而成，地黄素B、地黄素D和焦地黄素A在该地黄提取物中的总含量不低于90％。

上述地黄提取物的制备方法，包括如下步骤：

步骤S1，将鲜地黄洗净切片、干燥得到鲜地黄片；将鲜地黄片用乙醇水溶液热回流提取，合并提取液，减压浓缩得浸膏；

步骤S2，将浸膏用适量水溶解，先用石油醚萃取除杂，再用二氯甲烷萃取，合并二氯甲烷萃取液，浓缩干燥得二氯甲烷萃取物；

步骤S3，将二氯甲烷萃取物溶解拌树脂上样于XDA-1B大孔吸附树脂柱，先用30％乙醇洗脱除杂，再用75％乙醇洗脱，收集8-10BV洗脱液，浓缩干燥得到地黄提取物粗品；

步骤S4，将地黄提取物粗品上样于正相硅胶柱，用体积比为10:1:0.2的二氯甲烷/甲醇/异丙醇混合溶剂洗脱，收集6-7BV洗脱液，浓缩干燥得到富含地黄素B、地黄素D、焦地黄素A的地黄提取物。

优选地，步骤S1将鲜地黄片用95％乙醇水溶液热回流提取3次，每次2h，固液比为1:20，合并提取液，减压浓缩得浸膏。

优选地，步骤S2先用石油醚等体积萃取3次除杂，再用二氯甲烷萃取3次，合并二氯甲烷萃取液，浓缩干燥得二氯甲烷萃取物

优选地，步骤S2将二氯甲烷萃取物用30％乙醇水溶液溶解，拌树脂上样于XDA-1B大孔吸附树脂柱。

优选地，步骤S3中XDA-1B大孔吸附树脂柱的树脂径高比为1:10，拌样树脂占树脂总量的1/10。

优选地，步骤S3先用12BV的30％乙醇洗脱除杂，再用75％乙醇以10BV/h的流速洗脱，收集8-10BV洗脱液，浓缩干燥。

优选地，步骤S4中硅胶径高比为1:10，拌样硅胶占硅胶总量的1/10；用体积比为10:1:0.2的二氯甲烷/甲醇/异丙醇混合溶剂以10BV/h的速度洗脱，收集6-7BV洗脱液，浓缩干燥。

上述地黄提取物的HPLC分析方法，色谱参数如下：

色谱柱：Shim-packVP-ODS(4.6mm×250mm，5μm)；

流动相A相：乙腈/水按照体积比1:9的混合液，含5ppm的N-十六碳酰-L-丝氨酸钠；