[发明专利]一种用于检测人嗜T淋巴细胞病毒1型的试剂盒

说明书

本发明公开了一种用于检测人嗜T淋巴细胞病毒1型的试剂盒，包括由红细胞裂解液、反应液1、反应液2、阴性质控品和阳性质控品构成的反应体系；所述反应液1中包括根据人嗜T淋巴细胞病毒1型gap区的特异性设计的2条特异性引物和1条特异性探针，依据人基因组β珠蛋白的特异性设计的2条引物和1条特异性探针。本发明试剂盒利用聚合酶链式反应技术，能在较短的时间内定性检测人嗜T淋巴细胞病毒1型；灵敏度高，最低检出限为100 Copies/ml；特异性好，本发明根据gap区基因序列设计1对引物，与其他病原体无交叉干扰，具有较高的特异性。本发明对于人嗜T淋巴细胞病毒1型的输血诊断与临床检测具有较高的参考价值，适于推广应用。

技术领域

本发明涉及生物检测领域，尤其是涉及一种用于检测人嗜T淋巴细胞病毒1型的试剂盒。

背景技术

人嗜T淋巴细胞病毒1型与多种疾病有关，主要与成人T细胞白血病有密切关系，其传播途径主要是输血、性传播、静脉吸毒和家庭内传播，广泛分布与全世界，主要流行于日本西南部、加勒比海地区、非洲中部和中国东南沿海，严重威胁公共卫生安全。目前对人嗜T淋巴细胞病毒1型的检测主要采用传统的酶联免疫吸附法、明胶颗粒凝集法和间接荧光法，存在窗口期长、操作繁琐、假阳性和假阴性等问题。PCR技术由于其灵敏度高、特异性好和操作简便等优点，已经越来越广泛的应用于病毒检测，但目前尚未有将PCR技术应用于人嗜T淋巴细胞病毒1型检测方面。

发明内容

本发明的目的在于提供一种采用PCR技术检测人嗜T淋巴细胞病毒1型的试剂盒。

为实现上述目的，本发明可采取下述技术方案：

本发明所述的用于检测人嗜T淋巴细胞病毒1型的试剂盒，包括由红细胞裂解液、反应液1、反应液2、阴性质控品和阳性质控品构成的反应体系；所述反应液1中包括根据人嗜T淋巴细胞病毒1型gap区的特异性设计的2条特异性引物和1条特异性探针，依据人基因组β珠蛋白的特异性设计的2条引物和1条特异性探针：

引物1：5’- AGCCTTACCACACCTTCGTAG -3’（SEQ ID No.1）；

引物2：5’- TGGCATTCTTTGTTTGCATTGGAG -3’（SEQ ID No.2）；

引物3：5’- TGGAACATATTTGACGGCTTT -3’（SEQ ID No.3）；

引物4：5’- GATCTTAGCTACTACTGCCAA -3’（SEQ ID No.4）；

探针1：FAM- ACGTAGCCCTTGACAACGGACT –BHQ1（SEQ ID No.5）；

探针2：ROX- AAACCCACTGCATCACTCT –BHQ2（SEQ ID No.6）。

所述反应液2中含有20~30mM MgCl₂和0.09%叠氮化钠。

所述阴性质控品中仅含人β珠蛋白基因质粒；所述阳性质控品中含有人嗜T淋巴细胞病毒1型RNA片段的质粒和人β珠蛋白基因质粒。

所述红细胞裂解液中包含0.1~0.2M NH₄Cl，0.1~0.2mM EDTA和10~20mM NaHCO₃。

本发明的优点在于利用聚合酶链式反应技术，在50℃ 2min，94℃ 2min，（94℃5s， 55℃ 30s）40循环扩增条件下，使用实时荧光定量PCR仪进行荧光检测，依据Ct值对人嗜T淋巴细胞病毒1型进行定性检测，使用内部对照（β珠蛋白）、阴性质控品和阳性质控品对检测结果进行监控。