[发明专利]一种基于液质联用代谢组学分析玛咖标志性代谢产物的方法

权利要求书

1.一种基于液质联用代谢组学分析玛咖标志性代谢产物的方法，其特征在于，步骤如下：

(1)玛咖提取液的制备

将玛咖与甲醇混合，经超声提取后，离心，所得上清液过孔径0.22μm滤膜，即得玛咖提取液，置于-80℃备用；

(2)玛咖提取液预处理

将步骤(1)的玛咖提取液用甲醇稀释15-20倍，经过稀释后的玛咖提取液过孔径0.22μm滤膜，得滤液；

(3)分析检测

将步骤(2)的滤液采用UHPLC-Q Exactive Orbitrap LC-MS上样分析检测，检测参数为：

色谱柱为ACQUITYUPLC BEH C18柱2.1×50mm，1.7μm；

正谱条件：洗脱液A相为含0.1％(v:v)甲酸的乙腈溶液，B相为0.1％(v:v)甲酸水溶液；梯度洗脱流程为：0-2min 1％A，2-3.25min 1％-5％A，3.25-4.25min 5％A，4.25-7.75min5％-55％A，7.75-9.75min 55％-90％A，9.75-14.75min 90％A，14.75-15min 90％-1％A，15-18min 1％A；

负谱条件：洗脱液A相为含0.1％(v:v)甲酸的乙腈溶液，B相为10mM醋酸铵；梯度洗脱流程为：0-2min 1％A，2-3.25min 1％-5％A，3.25-4.25min 5％A，4.25-7.75min 5％-55％A，7.75-9.75min 55％-90％A，9.75-14.75min 90％A，14.75-15min 90％-1％A，15-18min1％A；

流速：0.3mL/min；进样体积：2μL；1min之前和16min之后不进质谱；

质谱条件：一级质谱分辨率70000(FWHM)，鞘气40Arb，辅助气10Arb，反吹气0Arb，正谱喷雾电压3.5KV,负谱喷雾电压3.1kV，毛细管温度320℃，辅助气温度350℃，扫描范围75-1125，扫描模式FullMS；

(4)Compound Discover数据处理

使用Compound Discover软件对原始数据进行提取、分析、整理，通过峰对齐、去卷积、降噪、归一化处理，得到原始数据矩阵；在Compound Discover数据处理过程中设置参数保留时间偏差为0.2min，质量偏差为5ppm，信噪比最大窗口为3，信号强度最大偏差30％，基础离子[M+H]⁺¹、[M-H]^-1，未知元素组成设定C90、H190、K、N5、Na、O15、P3、S5；

(5)SIMCA软件数据处理

将步骤(4)的原始数据矩阵导入SIMCA14.0进行分析，使用主成分分析PCA、偏最小二乘判别PLS-DA和正交-偏最小二乘判别OPLS-DA分析数据，运用置换排列实验检验；在正交-偏最小二乘判别OPLS-DA中导出的第一主成分的变量权重重要性排序值VIP，结合原始数据矩阵中的物质在两种玛咖中峰面积比值Ratio和P值，在正谱中选出VIP大于1、Ratio值大于20或小于0.05并且P值小于0.01的代谢物，在负谱中选出VIP大于2、Ratio值大于2或小于0.5并且P值小于0.01的代谢物，即认定为玛咖标志性代谢产物；

(6)玛咖标志性代谢产物的二级质谱信息

将步骤(5)的玛咖标志性代谢产物进行二级质谱分析，得到二级质谱信息；

质谱条件：二级质谱分辨率17500(FWHM)，扫描模式Ms/Ms，HCD高能碰撞池碰撞能量NCE：30、50、100、150；

二级质谱保留时间与一级质谱保留时间的允许偏差为0.2min，保留时间对应的物质即为不同表型玛咖的标志性代谢产物。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中玛咖与甲醇的用量比为1g：20mL，超声提取时间为20min。