[发明专利]一种大白兰花侧芽组织细胞萃取方法

说明书

本发明公开了一种大白兰花侧芽组织细胞萃取方法，涉及生物组织细胞萃取技术领域。本发明包括如下步骤：步骤1、植株培养，步骤2、新芽培育，步骤3、侧芽截取，步骤4、侧芽增殖生长，步骤5、侧芽生长点胚胎组织萃取，步骤6、萃取提纯，步骤7、萃取成分分析。本发明通过取大白兰花V3品种开花株节茎梗芽进行组织培养，用纯水为溶剂，以侧芽切割之新生细胞置入超音波设备设定在50‑60℃下进行高频萃取。

技术领域

本发明属于生物组织细胞萃取技术领域，特别是涉及一种大白兰花侧芽组织细胞萃取方法。

背景技术

一般组织培养均取具有分生能力的顶芽来进行培养，茎顶生长点生产多采用芽体增殖(芽长芽)或诱导拟原球体(PLBs)分生苗方式，其中芽体增殖(芽长芽)，亦即减低或去除顶芽优势，使侧芽容易长出来，以此方式增殖芽体。目前针对芽体一般采取传统水或酒精萃取,无进一步其他技术来萃取。

发明内容

本发明的目的在于提供一种大白兰花侧芽组织细胞萃取方法，通过取大白兰花V3品种开花株节茎梗芽进行组织培养，用纯水为溶剂，以侧芽切割之新生细胞置入超音波设备设定在室温下进行高频萃取。

为解决上述技术问题，本发明是通过以下技术方案实现的：

本发明为一种大白兰花侧芽组织细胞萃取方法，包括如下步骤：

步骤1、植株培养：取大白兰花V3品种的种子放入培养基中并施加足量的养分进行植株培养；

步骤2、新芽培育：待大白兰花V3品种植株开花，截取植株的茎，将所截取植株的茎以节为单位切成段作新芽培育；

步骤3、侧芽截取：取新芽的侧芽部分并进行切叶；

步骤4、侧芽增殖生长：对获取的新芽的侧芽切叶作增殖生长；

步骤5、侧芽生长点胚胎组织萃取：截取侧芽之生长点细胞组织切成小片段后，以5倍量纯水覆盖浸泡，置入超音波设备水温设定于50-60℃，功率设定300W，时间设定40分钟，进行梗芽生长点新生胚胎组织萃取得到萃取液；萃取液经抽真空过滤得到过滤萃取液，过滤萃取液利用减压浓缩机去除水得到粗萃取物；

步骤6、萃取提纯：将得到的粗萃取物以5倍量纯水覆盖浸泡，置入超音波设备水温设定于50-60℃，功率设定300W，时间设定40分钟，进行萃取，萃取后萃取液经抽真空过滤和减压浓缩机去除水，并重复进行3-5次以完成萃取得到大白兰花生长点萃取物，将获得的大白兰花生长点萃取物冷冻干燥后在-20℃冷藏备用；

步骤7、萃取成分分析：对获取的萃取成分进行总酚含量测定、总黄酮含量测定和总花青素含量测定。

进一步地，所述步骤2新芽培育包括以下步骤：

SS01、将茎的切段置于广口瓶中，用75％双氧水点滴叶腋处，再用75％的酒精消毒，最后再用无菌蒸馏水冲洗3～5次；

SS02、将消毒处理后的茎的切段接种至芽诱导培养基，调节光照和温度，培养6天～10天至长出新芽。

进一步地，所述芽诱导培养基是以MS培养基为基本培养基，添加100克/升～150克/升6-苄氨基腺嘌呤。

进一步地，所述光照的光强为1000～1500lux，所述温度为24-28℃。

进一步地，所述步骤4侧芽增殖生长包括如下步骤：

S01、将新芽的侧芽切叶接种到愈伤组织培养基上，在20-26℃、1000～1500lux的条件下培养20-60天，诱导愈伤组织生长形成原球茎；

S02、将原球茎接种到灭菌后的增殖培养基上，在22-26℃、1000～1500lux的条件下培养20-60天，使原球茎增殖生长。