[发明专利]一种纸基微流控芯片及基于其的磷酸化多肽的富集检测方法

权利要求书

1.一种纸基微流控芯片，由纸基材料、疏水封闭材料、磷酸基团亲和试剂和显色试剂组成，其特征在于，利用常用的纸基芯片制作方法，使纸基材料由疏水封闭材料阻隔形成液流通道、富集区、显色区和吸水区，亲和试剂修饰在富集区用于特异性结合磷酸化多肽，显色试剂滴加在显色区，其颜色的变化可以指示磷酸化多肽的存在, 芯片结构包括第一部件（1）、第二部件（2）、第三部件（3）、第四部件（4）和第五部件（5），第二部件（2）、第三部件（3）和第四部件（4）的材质为whatman1#滤纸，第一部件（1）和第五部件（5）的材质为聚丙烯膜，第一部件（1）为上层盖膜，其上用打孔器打出四个直径为3 mm的孔，分别对准第三部件（3）的左右两端和第二部件（2）的上下两端；第三部件（3）为多肽富集通道，长1.5 cm，其中心区域经过二氧化钛颗粒修饰，用于特异性结合磷酸化蛋白或多肽；第二部件（2）为显色通道，长0.75 cm，其上端滴加有0.5微升3.3 mM的溴酚蓝和1微升250 mM的柠檬酸缓冲液，在遇到蛋白质或多肽时由黄色变为蓝色；第四部件（4）为废液收集区，长1.5 cm，宽1.2 cm，其下端与第二部件（2）的上端相接，不断吸收废液，同时也为液体的流动提供驱动力；第五部件（5）为下层盖膜，其上用打孔器打出两个直径为3 mm的孔，分别对准第三部件（3）的左右两端；将第一部件（1）、第二部件（2）、第三部件（3）、第四部件（4）和第五部件（5）顺序放置，利用第一部件（1）和第五部件（5）将第二部件（2）、第三部件（3）、第四部件（4）封装固定，从而得到由whatman1#滤纸和聚丙烯膜制作的纸基微流控芯片。

2.根据权利要求1所述的纸基微流控芯片，其特征在于，所述纸基材料为由惰性纤维素形成的、具有毛细结构的、可以吸水的洁净纸材。

3.根据权利要求1或2所述的纸基微流控芯片，其特征在于，所述疏水封闭材料为易加工的易与所述纸基材料结合的疏水材料。

4.根据权利要求1或2所述的纸基微流控芯片，其特征在于，所述磷酸基团亲和试剂为与磷酸基团具有特异性亲和作用的金属氧化物、固定化金属离子、抗体试剂。

5.根据权利要求4所述的纸基微流控芯片，其特征在于，所述显色试剂为遇到肽段会发生颜色改变的试剂。

6.一种基于纸基微流控芯片的磷酸化多肽的富集检测方法，其特征在于，使用如下纸基微流控芯片，该纸基微流控芯片由纸基材料、疏水封闭材料、磷酸基团亲和试剂和显色试剂组成，其特征在于，利用常用的纸基芯片制作方法，使纸基材料由疏水封闭材料阻隔形成液流通道、富集区、显色区和吸水区，亲和试剂修饰在富集区用于特异性结合磷酸化多肽，显色试剂滴加在显色区，其颜色的变化可以指示磷酸化多肽的存在, 芯片结构包括第一部件（1）、第二部件（2）、第三部件（3）、第四部件（4）和第五部件（5），第二部件（2）、第三部件（3）和第四部件（4）的材质为whatman1#滤纸，第一部件（1）和第五部件（5）的材质为聚丙烯膜，第一部件（1）为上层盖膜，其上用打孔器打出四个直径为3 mm的孔，分别对准第三部件（3）的左右两端和第二部件（2）的上下两端；第三部件（3）为多肽富集通道，长1.5 cm，其中心区域经过二氧化钛颗粒修饰，用于特异性结合磷酸化蛋白或多肽；第二部件（2）为显色通道， 长0.75 cm，其上端滴加有0.5微升3.3 mM的溴酚蓝和1微升250 mM的柠檬酸缓冲液，在遇到蛋白质或多肽时由黄色变为蓝色；第四部件（4）为废液收集区，长1.5 cm，宽1.2 cm，其下端与第二部件（2）的上端相接，不断吸收废液，同时也为液体的流动提供驱动力；第五部件（5）为下层盖膜，其上用打孔器打出两个直径为3 mm的孔，分别对准第三部件（3）的左右两端；将第一部件（1）、第二部件（2）、第三部件（3）、第四部件（4）和第五部件（5）顺序放置，利用第一部件（1）和第五部件（5）将第二部件（2）、第三部件（3）、第四部件（4）封装固定，从而得到由whatman1#滤纸和聚丙烯膜制作的纸基微流控芯片；该方法包括如下步骤：步骤一：样品溶液的引入；步骤二：富集区的清洗；步骤三：磷酸化多肽的洗脱；步骤四：显色。