[发明专利]一种芡实种仁多糖及其分离提取方法和用途

说明书

本发明公开了一种芡实种仁多糖及其分离提取方法和用途，其中芡实种仁多糖的分子量为8.75ⅹ10³Da，单糖组成及摩尔比为葡萄糖醛酸：甘露糖：葡萄糖：半乳糖：阿拉伯糖＝0.55：0.6：52.7：1：4.3。本发明芡实种仁多糖可以促进胰岛素抵抗细胞的葡萄糖摄取量，具有研发降血糖保健食品和药物的应用前景。

技术领域

本发明涉及一种芡实种仁多糖及其分离提取方法和用途，属于天然产物提取和生物活性领域。

背景技术

Ⅱ型糖尿病(T2DM)是一种以高血糖为特征的糖代谢紊乱的疾病。近年来糖尿病患病率迅猛增长，据统计2010年中国糖尿病患病率已高达9.7％，患者人数达到了9240万，预计到2030年将增至1.29亿。因此，T2DM的防治已经成为影响中国公民健康的重要问题之一。糖尿病的主要发病机制是由于胰岛功能缺失或受损引起，既有遗传因素也有环境因素包括后天饮食、作息习惯、肥胖等影响引起胰岛素分泌不足，常常伴有胰岛素抵抗现象发生。

芡实(Eureyale ferox Salisb)是睡莲科(Nymphaeaceae)芡属(Euryale)一年生水生草本植物。野生芡实全国各地分布比较广，人工栽培主要以江苏、浙江和安徽等省为主。芡实成熟种仁含有丰富的基本营养成分，有碳水化合物、蛋白质、矿物质和维生素等，功效成分主要有黄酮类、环肽类、酚类、多糖、甾醇类和脑苷脂等成分。传统中医学上，芡实的成熟种仁具有益肾固精，有健脾利湿作用，常用于治疗遗精遗尿，脾虚久泄，白浊带下。文献调研发现，芡实粗提取物主要有抗氧化、抗心肌缺血、抗衰老、降血糖、降血压及抑菌、保护胃粘膜等作用。然而关于芡实多糖的研究还比较少，只有抗氧化活性方面的报道，目前尚未有芡实种仁多糖结构鉴定及降糖方面的活性报道。

发明内容

本发明提供了一种芡实种仁多糖及其分离提取方法和用途。本发明芡实种仁多糖可以促进胰岛素抵抗细胞的葡萄糖摄取量，天然无毒，具有研发降血糖保健食品和药物的应用前景。

本发明芡实种仁多糖，分子量为8.75ⅹ10³Da，单糖组成及摩尔比为葡萄糖醛酸：甘露糖：葡萄糖：半乳糖：阿拉伯糖＝0.55：0.6：52.7：1：4.3。本发明芡实种仁多糖的分离提取方法，包括如下步骤：

步骤1：分离提取

将成熟的芡实种仁粉碎成粉末，加入3-5倍体积的蒸馏水超声提取5min，然后于60℃水浴2h，四层纱布过滤，收集上清液，向滤渣中加入蒸馏水重复上述提取过程再次提取，合并上清液；将所得上清液旋蒸浓缩，然后加入四倍体积的无水乙醇4℃下静置沉淀，离心收集沉淀，加水溶解沉淀即得粗多糖水溶液；加水量使沉淀刚好完全溶解即可。

步骤2：sevag法脱蛋白

将步骤1获得的粗多糖水溶液、三氯甲烷和正丁醇按照体积比5：4：1的比例混合，磁力搅拌2-3h，离心后收集上清液；重复上述处理步骤直至蛋白质完全去除，获得脱蛋白芡实种仁多糖溶液；

步骤3：透析除杂

将步骤2获得的脱蛋白芡实种仁多糖溶液旋蒸浓缩除去有机试剂，使用3500KDa的透析袋，流水透析48h，蒸馏水透析24h，再次旋蒸浓缩至浓稠状液体，真空冷冻干燥，即得芡实种仁粗多糖；

步骤4：纯化

将步骤3获得的芡实种仁粗多糖通过Superdex^TM75葡聚糖凝胶柱洗脱分离，以蒸馏水为洗脱液，使用高效液相色谱跟踪检测分离效果，收集保留时间相同的多糖，浓缩冻干后即得芡实种仁纯多糖。