[发明专利]一种蛋白酶对铬鞣胶原蛋白纤维的催化水解性能评价方法

说明书

本发明提供了一种蛋白酶对铬鞣胶原蛋白纤维的催化水解性能评价和活力测定方法及其应用，包括以下步骤：（1）铬鞣皮粉底物的制备：加入一定量的铬鞣剂对皮粉进行鞣制，再经充分洗涤、干燥、粉碎、过20‑200目筛；（2）制备待测反应液：向50‑200 mg铬鞣皮粉中加入1‑20 mL缓冲液，混匀，加热至测定温度，加入蛋白酶溶液0.1‑5.0mL，在测定温度下振荡反应，反应结束后离心，取上清液进行消解，消解液经稀释后即为待测反应液；（3）消解液中的羟脯氨酸浓度测定及酶活力计算。该方法适用于在皮革领域中表征蛋白酶对铬鞣胶原蛋白纤维的水解活力及蛋白酶对蓝湿革作用性能的评价。

技术领域

本发明涉及一种蛋白酶对铬鞣胶原蛋白纤维的催化水解性能评价和活力测定方法及其应用，特别涉及一种表征蛋白酶对铬鞣胶原蛋白纤维的水解活力及蛋白酶对蓝湿革作用性能的评价方法，属于蛋白酶活力测定领域。

背景技术

随着对环境保护关注度的提高，越来越多的制革厂趋向于以购买蓝湿革作为生产原料。但是，购买的蓝湿革普遍存在皮革纤维结构分散不足、血筋和痘疤等伤残明显，不同来源的蓝湿革由于前处理工艺的不同导致的性能差异较大，在较长时间的储存和运输中导致的霉斑、色素、皮的板结、多皱纹和折痕等缺陷，严重影响后续加工工艺的统一和成革的性能及使用价值，因此，大多数以蓝湿革为原料的制革厂，在湿染整工段的第一个工序是对蓝湿革进行酶软化处理。

蓝湿革的酶软化过程是指用酶制剂处理蓝湿革中的蛋白、油脂和纤维间质等成分，最主要是用蛋白酶处理蛋白成分，来促进纤维结构的松散，减轻皮革粒面缺陷，达到增加成革均匀性、提高成革的柔软性、得革率和成革的物理机械性能和改善粒面感官性能等目的。因此，可以根据蓝湿革的状况和成革的性能要求，通过选择适当的酶制剂和软化工艺条件来控制处理程度，缩小不同来源的蓝湿革间的差异性，便于后处理工序的标准化，降低生产管理的难度。

动物皮中的主要蛋白成分是胶原蛋白，蓝湿革中的胶原蛋白纤维是被铬鞣后的胶原蛋白纤维，因此，蓝湿革的软化处理主要是用蛋白酶对铬鞣胶原蛋白纤维进行作用，但是，经过良好铬鞣的胶原蛋白纤维有较高的耐酶性，而且，蛋白酶对铬鞣蛋白纤维的作用能力会受含铬量的影响，鞣制后的蛋白纤维对不同蛋白酶的耐受性也存在差异。目前，以酪蛋白、变性血清蛋白和明胶等为底物的蛋白酶活力的测定方法，能表征蛋白酶的相对活力大小，但这些底物的结构、性质和状态与动物皮内胶原蛋白纤维相差较大，因而测定结果对制革过程中蛋白酶的优选并无实际指导意义。以未鞣制胶原蛋白纤维为底物的分析方法，根据羟脯氨酸是胶原蛋白特征的氨基酸这一原理，通过测定蛋白酶对未鞣制胶原蛋白纤维作用后所得水解液中的羟脯氨酸的含量来计算蛋白酶的胶原蛋白纤维水解活力，能更有效的表征酶对胶原蛋白纤维的作用活力，但是，铬鞣后的胶原蛋白纤维结构特征发生了较大的变化，其结果并不能反映蛋白酶对铬鞣胶原蛋白纤维的作用性能。由于缺乏表征蛋白酶对铬鞣胶原蛋白纤维作用性能的方法，目前的蓝湿革酶软化技术在蛋白酶的选择和软化条件的控制上主要是以经验判断，存在较大的盲目性。因此，为了正确选择适合的蓝湿革软化用蛋白酶，首先要建立定量表征蛋白酶对铬鞣胶原蛋白纤维作用性能的方法。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足而提供一种蛋白酶对铬鞣胶原蛋白纤维的催化水解性能评价和活力测定方法及其应用，以解决由于缺乏定量表征蛋白酶对铬鞣胶原蛋白纤维作用性能的方法而导致的蓝湿革酶软化技术在蛋白酶的选择和软化条件的控制上存在较大盲目性的问题。

可实现本发明上述目的一种蛋白酶对铬鞣胶原蛋白纤维的催化水解性能评价和活力测定方法，包括以下步骤：

（1）铬鞣皮粉底物的制备