[发明专利]一种利用CRISPR/Cas9系统突变OsHXK1获得产量提高植株的方法

权利要求书

1.一种提高水稻产量的方法，其特征在于，将OsHXK1基因经过突变，以降低OsHXK1蛋白表达量或者阻断OsHXK1蛋白的产生；

针对OsHXK1基因设计基于CRISPR/Cas9的靶标序列sgRNA序列，将含有编码sgRNA序列的DNA片段连接到携带CRISPR/Cas9的载体中，转化水稻，实现对水稻OsHXK1基因的敲除；

所述的靶标序列为如SEQ ID NO.5所示的核酸序列；

所述的OsHXK1蛋白为如SEQ ID No.1所述的氨基酸序列。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，OsHXK1基因为如SEQ ID No.2所述的核酸序列。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的方法具体包括以下步骤：

(1)构建含靶标序列片段的sgRNA载体；

步骤(1)中，首先合成带粘性末端的靶标引物对，将接头引物变性后移至室温冷却完成退火；将退火后的引物链接到经酶切后的sgRNA载体上，经PCR扩增和测序验证阳性质粒；

(2)构建含靶标序列片段的pCRISPR/Cas9载体；

步骤(2)为将含靶位点序列片段的sgRNA表达盒从sgRNA载体上切下，然后连接到含Cas9表达盒的pCRISPR/Cas9载体上；

(3)转化；

步骤(3)为将含靶标的pCRISPR/Cas9载体转化水稻愈伤组织，经筛选，分化和生根成苗，将转基因植株种植于网室；通过潮霉素鉴定阳性转基因植株；

步骤(3)中，通过农杆菌介导的遗传转化或基因枪法转化pCRISPR/Cas9载体到水稻愈伤组织；

所述的方法还包括：

(4)对突变位点的鉴定；

步骤(4)中，采用如SEQ ID No.3和SEQ ID No.4所示的引物对进行鉴定。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述的sgRNA的载体为pU3-gRNA和/或pU6-gRNA。

5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，带粘性末端的靶标引物对为如SEQ ID NO.6和SEQ ID NO.7所示的核酸序列。