[发明专利]一种泽泻药材的鉴别和质量检测方法

权利要求书

1.一种泽泻药材的鉴别和质量检测方法，其特征在于，所述方法包括以下内容：

（1）泽泻药材拉曼光谱建模步骤如下：

1）将银溶胶与泽泻对照药材按重量比为1:1充分混合，将表面吸附了银溶胶的泽泻对照药材均匀分散在镀银镜的石英玻璃片上，再将玻璃片直接装在样品架上测定药材断面的拉曼光谱作为对照光谱；

2）将银溶胶与待测药材按重量比为1:1充分混合后，将表面吸附了银溶胶的待测药材均匀分散在镀银镜的石英玻璃片上，再将玻璃片装在样品架上测定药材断面的拉曼光谱，与对照光谱作比较，鉴别药材饮片的真伪和品质及是否被硫熏处理的情况；

（2）泽泻药材DNA拉曼光谱建模步骤如下：

1）提取泽泻的高浓度DNA，并分别用0 .8%琼脂糖电泳和紫外分光光度计判定DNA的大小和DNA的质量；

2）将银溶胶与泽泻对照药材DNA按重量比1:1充分混合，将表面吸附了银溶胶的泽泻对照药材DNA均匀分散在镀银镜的石英玻璃片上，再将玻璃片装在样品架上测定其拉曼光谱作为DNA对照光谱；

3）将银溶胶与待测药材DNA按重量比1:1充分混合，取表面吸附了银溶胶的待测药材DNA均匀分散在镀银镜的石英玻璃片上，再将玻璃片装在样品架上测定药材DNA的拉曼光谱，与对照光谱DNA作比较，鉴别药材真伪及品质；

（3）泽泻药材中乙酰泽泻醇B的含量测定，步骤如下：

1）制备对照品溶液：取乙酰泽泻醇B对照品适量，精密称定，加乙腈制成每1mL含20μg的溶液，即得；

2）制备供试品溶液：取泽泻药材饮片粉末0 .5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入乙腈25mL，密塞，称定重量，超声处理30min，放冷，再称定重量，用乙腈补足减失的重量，摇匀滤过，取续滤液即得；

3）分别取乙酰泽泻醇B对照品适量，精密称定，加乙腈分别制成浓度为0 .05、0 .1、0.5、1、5、10、25、50、100μg/mL的溶液，将溶液分别与银溶胶按重量比1:1的比例混合，充分混合后分别取溶液各1mL，移入石英玻璃毛细管进行SERS光谱量测；以拉曼光谱强度(I)为纵坐标，浓度(C)为横坐标绘制标准曲线，计算回归方程；

4）将对照品溶液与供试品溶液分别与银溶胶按重量比1:1的比例混合，充分混合后取对照品溶液与供试品溶液各1mL，分别移入石英玻璃毛细管进行SERS光谱量测；计算待测药材中乙酰泽泻醇B含量；

所述银溶胶的制备步骤如下：

制备浓度为1×10^-3mol/L的硝酸银溶液，加热到沸腾；然后向沸腾的硝酸银溶液中逐滴加入新配置的重量含量为1%的柠檬酸三钠溶液5mL；保持沸腾状态30min后，继续搅拌至溶液冷却，即得青黄色的、最大吸收波长为420 nm的银溶胶。

2.根据权利要求1所述泽泻药材的鉴别和质量检测方法，其特征在于，所述镀银镜的石英玻璃片的制作步骤如下：

量取1mL 2%的硝酸银溶液，加入0 .1mL 10%的NaOH溶液，震荡试管看到沉淀，逐步滴入2%的氨水至沉淀恰好溶解；再加入3mL葡萄糖溶液或0 .15mL甲醛，震荡后将石英玻璃片放入反应容器内，把反应容器放入55℃热水中，超声震荡反应1 .5min，使石英玻璃片镀上银镜。

3.根据权利要求1所述泽泻药材的鉴别和质量检测方法，其特征在于，所述泽泻药材DNA拉曼光谱建模步骤1）的具体步骤如下：

（1）配制试剂：

1）配制1mol/L的Tris-HCl：称取Tris碱6 .06g，加入超纯水40mL溶解，滴加浓HCl调节pH至8 .0，再加超纯水定容至50mL；

2）配制CTAB-free 缓冲液：配制内含Tris-HCl浓度为0 .2mol/L、EDTA浓度为0.05mol/L、 NaCl浓度为0 .25mol/L，内含4%巯基乙醇的溶液；

3）配制TE缓冲液：精密量取1mL 1mol/L的Tris-HCl，加入0 .2mL 0 .5mol/L的EDTA，加入超纯水定容至100mL；

（2）琼脂糖电泳法判定DNA的大小步骤如下：

1）称取泽泻粉末0 .5g，加入4 ℃预冷的CTAB-free 缓冲液2mL，没过粉末表面，在4℃恒温冰箱内放置10min，再在4℃下7000r/min离心10min，弃上清液；

2）加入0 .05g维生素C干粉末，涡旋使溶解均匀，调节pH值为6 .0～6 .5，得到DNA溶液；

3）在0 .8%琼脂糖凝胶、1*TAE缓冲液、200V电压条件下，取5uLDNA溶液做0 .8%的琼脂糖电泳，时间为30min，检查DNA的大小；

（3）紫外分光光度计判定DNA的质量，步骤如下：

1）称取泽泻粉末0 .5g，加入4℃预冷的CTAB-free 缓冲液2mL，在4℃恒温冰箱内放置10min；

2）加2mL的氯仿-异戊醇，轻轻颠倒混匀，4℃下12000r/min离心10min；

3）取上清液转移至新管，重复步骤2）；

4）取上清液转移至新管，加入2倍体积预冷的无水乙醇，常温静置5min，短暂离心，去掉上清液，用70%乙醇洗涤3次得到DNA；

5）将DNA放于通风处晾干，用1mL纯化水溶解得到DNA溶液；

6）取5uLDNA溶液用紫外分光光度计判定DNA的质量。