[发明专利]多特异单克隆抗体

权利要求书

1.一种从包含轻链LC1和重链HC1并结合抗原1的抗体以及包含轻链LC2和重链HC2并结合不同的抗原2的另一种抗体产生多特异性单链抗体的方法，所述方法包括以下步骤：

(a)通过以下步骤鉴别在功能上补充所述HC1和HC2重链的免疫球蛋白重链可变抗体区的单个免疫球蛋白轻链可变抗体区：

(i)筛选通过共表达重链HC1的所述免疫球蛋白重链可变抗体区产生的抗体文库以及通过演化轻链LC1产生的人LC1文库以得到结合所述抗原1的抗体；

(ii)筛选通过共表达重链HC2的所述免疫球蛋白重链可变抗体区产生的另一个抗体文库以及通过演化轻链LC2产生的人LC2文库以得到结合所述抗原2的抗体；

(iii)通过以下选择抗体：

(1)共表达获自步骤(i)的结合所述抗原1的抗体的轻链与重链HC2的所述免疫球蛋白重链可变抗体区并选择出结合所述抗原2的抗体，或

(2)共表达获自步骤(ii)的结合所述抗原2的抗体的轻链与重链HC1的所述免疫球蛋白重链可变抗体区并选择出结合所述抗原1的抗体，

其中在步骤(1)或(2)中所选择出的抗体的轻链可变区是在功能上补充重链HC1和重链HC2的两个不同的免疫球蛋白重链可变抗体区的免疫球蛋白轻链可变区；

(b)克隆重链HC1和重链HC2的所述两个不同的免疫球蛋白重链可变抗体区以及步骤(a)中鉴别出的免疫球蛋白轻链可变抗体区以形成单链抗体构建体；

(c)在宿主细胞中表达所述单链抗体构建体以产生多特异性单链抗体。

2.根据权利要求1所述的方法，还包括演化所述多特异性单链抗体中的轻链可变抗体区和重链可变抗体区以改善所述多特异性单链抗体的一种或多种特性的额外步骤。

3.根据权利要求2所述的方法，其中，所述一种或多种特性选自：平衡解离常数(K_D)、稳定性、解链温度(T_m)；pI、溶解度、表达水平、降低的免疫原性和改善的效应器功能。

4.根据权利要求2所述的方法，其中，所述额外的演化步骤包括以下的一种或多种：综合位置演化(CPE)；综合位置插入演化(CPI)、综合位置缺失演化(CPD)；由组合蛋白合成(CPS)跟随的综合位置演化(CPE)；以及由组合蛋白合成(CPS)跟随的综合位置缺失演化(CPD)。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，还包括使所述多特异性单链抗体与有机部分缀合以产生缀合的多特异性单链抗体的步骤。

6.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其中所述多特异性单链抗体特异性地结合3个表位、或4个表位、或5个表位、或更多个表位。

7.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其中所述宿主细胞是真核宿主细胞系，所述真核宿主细胞系选自：3T3小鼠成纤维细胞；BHK21叙利亚仓鼠成纤维细胞；MDCK、犬上皮细胞；Hela人体上皮细胞；PtKl大鼠袋鼠上皮细胞；SP2 / 0小鼠浆细胞；NS0小鼠浆细胞；HEK293人胚胎肾细胞；COS猴肾细胞；CHO、CHO-S中国仓鼠卵巢细胞；Rl小鼠胚胎细胞；E14.1小鼠胚胎细胞；HI人类胚胎细胞；H9人类胚胎细胞；PF.R C.6.人类胚胎细胞；酿酒酵母(S.cerevisiae)细胞；以及毕赤(picchia)酵母细胞。

8.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其中，所述宿主细胞是原核宿主细胞。

9.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，还包括制造所述多特异性单链抗体的步骤。