[发明专利]一种抗非特异性吸附三维芯片及其应用

权利要求书

1.一种抗非特异性吸附三维芯片，其特征在于：由固体支撑层、通过Au-S键连接于支撑层上的引发剂层、共价结合于引发剂层上的点击交联层和共价键结合于点击交联层上的聚乙二醇丙烯酸甲酯层组成；

所述三维芯片的制备方法包括如下步骤：

1)通过金属-巯基之间的作用，利用自组装技术将引发剂层组装于支撑层的表面上形成引发剂层；

2)将表面覆盖有引发剂的支撑层浸泡在含炔基/叠氮基团单体、聚乙二醇丙烯酸甲酯单体和催化剂的甲醇-水混合溶液中，并在保护气体氛围下、于30～55℃反应1～6小时，清洗芯片，得到共价结合于引发剂层上的含炔基/叠氮官能团的聚合物层；

3)把步骤2)中含炔基/叠氮官能团聚合物层的芯片浸泡于含有叠氮-聚乙二醇-叠氮或者炔基-聚乙二醇-炔基的点击交联剂和催化剂的甲醇-水混合溶液中，于保护气体氛围下、在30～55℃下反应1～2小时，得到点击交联层；

4)把步骤3)中含点击交联层的芯片置于含有聚乙二醇丙烯酸甲酯单体和催化剂的甲醇-水混合溶液中，在保护气体氛围下、于30～55℃反应3～12个小时，得聚乙二醇甲基丙烯酸甲酯层，即得抗非特异性吸附芯片。

2.根据权利要求1所述的抗非特异性吸附三维芯片，其特征在于：所述支撑层是表面镀有金膜或银膜的玻璃基片。

3.根据权利要求1所述的抗非特异性吸附三维芯片，其特征在于：所述引发剂层包括稀释剂和引发剂，引发剂和稀释剂的摩尔比为1-100:1000；所述稀释剂的结构式为下列1～III中的一种：

其中n为6-12的正整数；

所述引发剂的结构式为1～III中的一种：

其中n为6-12的正整数。

4.根据权利要求1所述的抗非特异性吸附三维芯片，其特征在于，所述含炔基/叠氮基团单体的结构式为I～II中的一种：

所述聚乙二醇丙烯酸甲酯单体的结构式为：

其中n为6、8、10或12；

所述叠氮-聚乙二醇-叠氮的结构式为：

其中n为5～50的正整数；

所述炔基-聚乙二醇-炔基的结构式为：

其中n为5～50的正整数。

5.根据权利要求1所述的抗非特异性吸附三维芯片，其特征在于：所述催化剂为卤化铜与抗坏血酸钠；所述甲醇与水的摩尔比为1-3:1。

6.根据权利要求1所述的抗非特异性吸附三维芯片，其特征在于：所述保护气体为氮气或氩气。

7.一种根据权利要求1-6任一项所述的抗非特异性吸附三维芯片的应用，其特征在于：是在所述芯片上固定蛋白质后用于蛋白相互作用的检测，且芯片能抑制血浆和细胞裂解液的非特异性吸附。

8.根据权利要求7所述的抗非特异性吸附三维芯片的应用，其特征在于，所述应用包括如下步骤：

1)将芯片浸泡于含有二酸酐与溶剂的溶液中，在30～55℃下反应1～12小时，清洗芯片，得到表面羧基化的芯片；

2)把步骤1)中表面羧基化的芯片浸泡在由1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐与N-羟基琥珀酰亚胺配成的水溶液中，在常温下反应30～120分钟，清洗，得到表面活化的芯片；

3)把蛋白质通过点样机点于步骤2)表面活化的芯片的表面，室温反应1～3小时，清洗芯片得到固定蛋白的芯片；

4)将步骤3)固定蛋白的芯片按照SPR仪器操作流程固定于仪器中，并以缓冲液作为流动相，基线稳定后，通入作用蛋白，随后依次通入PBS、血浆及PBS即可。

9.根据权利要求8所述的抗非特异性吸附三维芯片的应用，其特征在于：所述二酸酐为丁二酸酐或戊二酸酐；所述溶剂为N，N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜或者四氢呋喃；1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐与N-羟基琥珀酰亚胺的摩尔比为1:3-6。