[发明专利]一种铜绿假单胞菌以及含该菌的海洋哺乳动物疫苗

说明书

本发明公开了一种铜绿假单胞菌及含该菌的海洋哺乳动物疫苗。其中使用的菌株为从海洋哺乳动物中分离的铜绿假单胞菌DCP1株，保藏编号为CGMCC NO.15418。本发明还保护一种海洋哺乳动物疫苗，其活性成分为灭活后的海洋哺乳动物的铜绿假单胞菌抗原。本发明还保护一种海洋哺乳动物疫苗的制备方法，包括菌株的分离、鉴定、纯化、抗原制备和疫苗制备等过程。本发明制备的铜绿假单胞菌灭活疫苗安全可靠，能够显著提高抗体水平，有着广泛的应用前景。

技术领域

本发明涉及疫苗技术领域，具体涉及一种铜绿假单胞菌以及将其灭活后制备得到的海洋哺乳动物疫苗。

背景技术

随着人民生活水平的提高，物质需求向精神需求的转变，促进了国内水族馆行业飞速发展，对海洋哺乳动物资源的需求随之越来越多，尤其是具有展演展示天赋的海洋哺乳动物，如瓶鼻海豚、白鲸等，在国内各水族馆饲养的数量不断攀升。当海洋哺乳动物被从宽广的野生海洋环境转入人工饲养环境，受生活空间的大大缩小，食物，水质，海流，水温等等因素的限制，生活环境的严格限制以及人工饲养条件与天然生活巨大差别，不可避免的给动物带来巨大的应激和压力，从而导致动物免疫力低下，容易罹患疾病，巨大的参观人流造成室内或外部空气质量的污浊，更加导致海洋哺乳动物患呼吸系统疾病的风险不断增加。由于海洋哺乳动物罹患疾病具有隐蔽性及诊断治疗方面的困难，海洋哺乳动物的死亡率一直很高，这是困扰世界水族馆业的重要问题。

铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)属假单胞菌属(pseudomonas)，为革兰氏阴性杆菌，两端钝圆，一端有一根鞭毛，能运动，不能形成芽孢及荚膜。在普通琼脂培养基上生长良好，形成大小不一的菌落。是在土壤、水中等自然环境中广泛分布的革兰氏阴性杆菌，能引起人类和动物的化脓性病变。感染后因脓汁和渗出液等病料呈绿色，故又名铜绿假单胞菌。铜绿假单胞菌还是导致海洋哺乳动物发生细菌性支气管肺炎和皮炎甚至引起死亡的重要原因。

随着抗生素不合理的应用，铜绿假单胞菌对抗菌药的耐药性呈现逐年上升的趋势，并且开始产生对3类或3类以上抗菌药均表现耐药的多重耐药，甚至泛耐药的现象。铜绿假单胞菌因耐药率高导致抗菌药物治疗困难的现状已成为目前国内外临床抗感染治疗的棘手问题，鉴于铜绿假单胞菌日益严重的耐药现状，迫使我们急切需要寻求抗菌药物之外的其他手段来治疗和预防铜绿假单胞菌感染。免疫预防一直都是人们防治疾病的一个重要手段，因此研究有效的疫苗成为防治铜绿假单胞菌感染的重要策略之一。

发明内容

本发明旨在针对目前海洋哺乳动物中缺乏一种有效的细菌性肺炎疫苗进行疾病防护的技术问题，提供一种铜绿假单胞菌以及将其灭活得到的海洋哺乳动物疫苗。

为实现以上技术目的，本发明采用以下技术方案：

一种铜绿假单胞菌Pseudomonas aeruginosa DCP1菌株，菌种保藏号为：CGMCCNO.15418。

本发明中，所述菌株为从海洋哺乳动物中分离得到，所述海洋哺乳动物为海豚、海鲸、海狮或海象。

一种海洋哺乳动物疫苗，所述疫苗包括抗原液，所述抗原液为权利要求1所述铜绿假单胞菌Pseudomonas aeruginosa DCP1菌株的灭活浓缩菌液，菌液浓度≥6×10⁹个细菌/mL。

进一步地，所述疫苗还包括疫苗佐剂，抗原液：疫苗佐剂的质量比为70：30～60：40。

优选地，所述疫苗的剂型为皮下注射剂或肌肉注射剂。

优选地，所述灭活浓缩菌液的制备方法包括如下步骤：

1)从海洋哺乳动物的气孔喷出物中分离出铜绿假单胞菌，通过培养、纯化、分子生物学和生化鉴定符合铜绿假单胞菌的特征，命名为铜绿假单胞菌Pseudomonas aeruginosaDCP1菌株；