[发明专利]一种靶向表达PSMA表面抗原的细胞的嵌合抗原受体

说明书

本发明涉及一种靶向表达PMSA表面抗原的细胞的嵌合抗原受体，包含PSMA抗原结合结构域、跨膜结构域和细胞内信号结构域，所述PSMA结合结构域的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。本发明还涉及编码所述嵌合抗原受体的核酸，还涉及表达所述嵌合抗原受体的重组表达载体。通过将本发明的嵌合抗原受体表达于T细胞中可使得到CAR‑T细胞能够有效并且特异性地靶向表达PMSA表面抗原的恶性细胞，从而为治疗一些表达PMSA表面抗原的肿瘤，例如前列腺癌等，提供更高效的方法。

技术领域

本发明涉及细胞免疫治疗技术领域，具体涉及一种靶向表达PSMA表面抗原的细胞的嵌合抗原受体及其编码序列和表达载体。

背景技术

前列腺癌是男性中最常见的恶性肿瘤并且排在癌症死亡原因的第二位。局限型前列腺癌通常使用手术或放射进行治疗，复发性疾病可使用雄激素撤除暂时控制。然而，几乎所有的前列腺癌最终都会变成激素耐受性，然后迅速发展。激素耐受性或雄激素非依赖性前列腺癌已证明很大程度上抵抗常规化学疗法。除了姑息治疗之外，唯一获批的化学疗法是与泼尼松组合的多西他赛，其提供了有限的(2.4个月)的生存效果。需要新的分子靶向疗法。

PSMA是一种前列腺细胞膜上的Ⅱ型跨膜糖蛋白，由三个结构域组成，其氨基端位于细胞膜内，共含750个氨基酸，其中胞内段19个，跨膜段24个，胞外段707个，其胞内段和胞外段有多个抗原表位，与多种蛋白有着密切联系。免疫组化显示，PSMA在前列腺的正常组织，良性增生组织，上皮内增生，癌组织中均有表达，且表达强度依次上升，在前列腺癌中表达强度最高；在前列腺癌淋巴结转移灶，骨转移灶中表达呈阳性。同时PSMA在多种非前列腺的恶性肿瘤也有一定的表达，这些肿瘤主要包括肾透明细胞癌，膀胱移行细胞癌，结肠腺癌，胰导管癌，非小细胞肺癌，如组织肉瘤，乳腺癌等。

PSMA具有较高的特异性和位于前列腺上皮细胞膜的特性，其在前列腺癌及其转移灶中表达增高，在前列腺癌的靶向治疗中具有重要意义。

嵌合抗原受体主要由两部分构成，一端位于细胞外能够特异性识别癌细胞表面的某一抗原，另一端位于胞内含有信号激活元件(如T细胞受体的Zeta链)，起传递信号激活T细胞的作用。将识别肿瘤表面特异性抗原的单克隆抗体高变区序列在体外重组、亚克隆为单链抗体片段(Single chain antibody fragment of variable regions，scFv)，再与其他基因的跨膜蛋白片段和胞内信号肽融合形成人造的嵌合抗原受体(Chimeric antigenreceptor，CAR)，转染至T细胞内而形成嵌合抗原受体T细胞(Chimeric antigen receptor，CAR-T)。在这种治疗方法中，CAR的作用至关重要。嵌合抗原受体包括单链抗体结构域、跨膜结构域、胞内信号结构域。其中，单链抗体结构域将免疫细胞靶向目标细胞，胞内信号结构域释放胞内信号，启动免疫细胞的杀伤活性。

发明内容

为了克服现有技术中存在的缺点和不足，本发明提供了一种靶向表达PSMA表面抗原的细胞的嵌合抗原受体，包含PSMA结合结构域、跨膜结构域和细胞内信号结构域，所述PSMA结合结构域的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。

优选地，所述跨膜结构域为CD8，其氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。

优选地，所述胞内结构域肽段为共刺激信号分子，选自CD28、4-1BB、CD3ζ的胞内结构域肽段中的一种或多种。更为优选的，所述细胞内信号结构域由CD28、4-1BB和CD3组成，其氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示。

本发明还提供了一种编码上述嵌合抗原受体的核酸分子，其核酸序列如SEQ IDNO:4所示。

本发明还提供了一种表达上述嵌合抗原受体的重组表达载体，其包括嵌合抗原受体表达框和复制系统，所述嵌合抗原受体表达框由可在T细胞中表达的启动子和位于所述启动子下游的编码所述嵌合抗原受体的核酸组成。