[发明专利]一种香菇柄多糖的制备方法

权利要求书

1.一种香菇柄多糖的制备方法，其特征是以新鲜香菇柄为原料，预处理后冷冻干燥、超低温冷冻粉碎、复合酶法耦合高剪切提取、超声波耦合三氯乙酸除蛋白、柱层析、透析和冷冻干燥，得香菇柄多糖组分1和组分2。

2.根据权利要求1所述的一种香菇柄多糖的制备方法，其特征是：所述超低温冷冻粉碎是在-45℃以下冷冻粉碎过100目筛，得香菇柄粉；此时所得香菇柄粉相对于常温粉碎所得产品颜色明显变浅，超低温冷冻粉碎多糖损失率小于0.4%（以葡萄糖计，下同），相对于常温粉碎，多糖损失率降低10%以上。

3.根据权利要求1所述的一种香菇柄多糖的制备方法，其特征是：所述复合酶法耦合高剪切提取是首先在1份香菇柄粉，纤维素酶用量0.006～0.008份、木瓜蛋白酶用量0.01～0.02份、pH值4.2～5.0的磷酸氢二钠和柠檬酸缓冲液20～30份、酶解温度44～50℃、酶解时间40～60min、电压70～90V、高剪切时间110～130s条件下提取（这段时间复合酶法提取和高剪切提取同时进行）；然后提取结束后，4000r/min离心15min、取上清液浓缩至低于初始体积的20%、调整乙醇浓度至80%、0～4℃沉淀8～12h；最后4000r/min离心15min，取沉淀物，冷冻干燥，得香菇柄提取物；此时多糖得率大于9.0%，相对于单独使用复合酶法、单独使用高剪切提取、超声波辅助提取、微波辅助提取或热水浸提法，得率提高0.6%以上。

4.根据权利要求1所述的一种香菇柄多糖的制备方法，其特征是：所述超声波耦合三氯乙酸除蛋白是首先将香菇柄提取物加入到40倍3%（m/v）的三氯乙酸后，在超声波频率40KHz和超声波处理温度40～50℃的条件下处理10～15min；然后4000r/min离心15min，取上清液浓缩至低于初始体积的20%、调整乙醇浓度至80%、0～4℃沉淀8～12h；最后4000r/min离心15min，冷冻干燥得香菇柄粗多糖冻干粉；此时除蛋白效率大于80%、多糖损失率小于16%，相对于单独使用三氯乙酸除蛋白，除蛋白效率提高3%以上、多糖损失率降低4.5%以上。

5.根据权利要求1所述的一种香菇柄多糖的制备方法，其特征是：所述柱层析是首先将预处理好的纤维素DEAE-52阴离子交换树脂湿法装入规格为1.6cm×20cm层析柱中；其次取2mL浓度为10mg/mL的香菇柄粗多糖冻干粉水溶液进行上样，待上样结束后分别采用0、0.1、0.2、0.3、0.4mol/L氯化钠溶液进行洗脱，洗脱速度为1mL/min，每10mL收集一管，每个氯化钠浓度洗脱20管，共100管，根据苯酚-硫酸法测定其吸光值，以洗脱管数为横坐标，测量的吸光值为纵坐标，氯化钠浓度为次纵坐标轴绘制洗脱曲线；然后根据洗脱曲线分别收集0.1mol/L氯化钠溶液洗脱的前10管和0.2mol/L氯化钠溶液洗脱的前8管；最后透析、浓缩、冷冻干燥，分别得到香菇柄多糖组分1和组分2。

6.根据权利要求1、4和5所述的一种香菇柄多糖的制备方法，其特征是：所述冷冻干燥是在冷冻干燥机真空度小于100Pa、冷阱温度低于-45℃条件下干燥至水分含量低于5%。

7.根据权利要求1和5所述的一种香菇柄多糖的制备方法，其特征是：所述透析是采用MD34（孔径为8000-14000da）超滤透析袋透析72h，每6h换一次去离子水。